农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2015年
3期
359-368
,共10页
李艳艳%邵芳%吴小娟%石亦静%郁建锋%顾志良
李豔豔%邵芳%吳小娟%石亦靜%鬱建鋒%顧誌良
리염염%소방%오소연%석역정%욱건봉%고지량
鹅%肌球蛋白重链1(MyHC1)%胚胎期%组织表达分析
鵝%肌毬蛋白重鏈1(MyHC1)%胚胎期%組織錶達分析
아%기구단백중련1(MyHC1)%배태기%조직표체분석
Anser anser%Myosin heavy chain 1 (MyHC1)%Embryonic stage%Tissue expressional pattern
肌球蛋白是组成肌原纤维粗丝的主要成分,在肌肉生长发育和运动收缩过程起重要作用.本研究采用反转录PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification cDNA ends,RACE)方法,从太湖鹅(Anser anser)肌肉中克隆到肌球蛋白重链1基因(myosin heavy chain 1,MyHC1)的全长cDNA,并运用生物信息学的方法对其进行分析,实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测MyHC1基因在鹅胚胎期的表达情况.研究结果表明,鹅MyHC1基因(GenBank登录号:KM675469)cDNA全长6028 bp,包含5 823 bp的开放性阅读框,57 bp的5'端非编码区和148 bp的3'端非编码区,共编码1 940个氨基酸.经预测,鹅MyHC1基因编码的蛋白质由31 478个原子组成,分子式为C9746H15817N2753O3096S66,相对分子质量为223kD,等电点为5.62,平均亲水性为-0.786,属于不稳定亲水蛋白.在线预测鹅和鸡(Gallus gallus)的MyHC1蛋白质三维结构呈高度相似,由多螺旋和折叠片聚集成球状头部,并带有长纤维状α-螺旋尾部.鹅MyHC1的编码区(coding sequence,CDS)序列与鸡的同源性最高,为92.86％,与哺乳类同源性多数在84％左右,与两栖类同源性相对较低.鹅与鸡氨基酸同源性最高,为96.45％,与哺乳类的同源性多数在90％左右,与非洲爪蛙(Xenopus laevis)同源性较低,为78.13％.系统进化树分析表明,哺乳动物形成一个大分支,两栖类自成一支,鹅和红原鸡聚成一支,分子进化地位的关系最近,验证了鹅和鸡属于近缘物种.qRT-PCR检测到MyHC1基因在胚胎期第7天开始表达,以后表达量逐渐升高,在15d表达量达到高峰后下降,25 d之后逐渐趋于平稳,表明,MyHC1基因在鹅胚胎期mRNA水平的表达量呈先上升再下降的趋势.本研究首次获得了鹅MyHC1的全长cDNA序列、分子的结构特点和表达特征,显示该基因在鹅肌肉生长发育过程起重要作用,为该基因的功能及鹅肉质性状研究提供了基础资料.
肌毬蛋白是組成肌原纖維粗絲的主要成分,在肌肉生長髮育和運動收縮過程起重要作用.本研究採用反轉錄PCR和快速擴增cDNA末耑(rapid amplification cDNA ends,RACE)方法,從太湖鵝(Anser anser)肌肉中剋隆到肌毬蛋白重鏈1基因(myosin heavy chain 1,MyHC1)的全長cDNA,併運用生物信息學的方法對其進行分析,實時熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)檢測MyHC1基因在鵝胚胎期的錶達情況.研究結果錶明,鵝MyHC1基因(GenBank登錄號:KM675469)cDNA全長6028 bp,包含5 823 bp的開放性閱讀框,57 bp的5'耑非編碼區和148 bp的3'耑非編碼區,共編碼1 940箇氨基痠.經預測,鵝MyHC1基因編碼的蛋白質由31 478箇原子組成,分子式為C9746H15817N2753O3096S66,相對分子質量為223kD,等電點為5.62,平均親水性為-0.786,屬于不穩定親水蛋白.在線預測鵝和鷄(Gallus gallus)的MyHC1蛋白質三維結構呈高度相似,由多螺鏇和摺疊片聚集成毬狀頭部,併帶有長纖維狀α-螺鏇尾部.鵝MyHC1的編碼區(coding sequence,CDS)序列與鷄的同源性最高,為92.86％,與哺乳類同源性多數在84％左右,與兩棲類同源性相對較低.鵝與鷄氨基痠同源性最高,為96.45％,與哺乳類的同源性多數在90％左右,與非洲爪蛙(Xenopus laevis)同源性較低,為78.13％.繫統進化樹分析錶明,哺乳動物形成一箇大分支,兩棲類自成一支,鵝和紅原鷄聚成一支,分子進化地位的關繫最近,驗證瞭鵝和鷄屬于近緣物種.qRT-PCR檢測到MyHC1基因在胚胎期第7天開始錶達,以後錶達量逐漸升高,在15d錶達量達到高峰後下降,25 d之後逐漸趨于平穩,錶明,MyHC1基因在鵝胚胎期mRNA水平的錶達量呈先上升再下降的趨勢.本研究首次穫得瞭鵝MyHC1的全長cDNA序列、分子的結構特點和錶達特徵,顯示該基因在鵝肌肉生長髮育過程起重要作用,為該基因的功能及鵝肉質性狀研究提供瞭基礎資料.
기구단백시조성기원섬유조사적주요성분,재기육생장발육화운동수축과정기중요작용.본연구채용반전록PCR화쾌속확증cDNA말단(rapid amplification cDNA ends,RACE)방법,종태호아(Anser anser)기육중극륭도기구단백중련1기인(myosin heavy chain 1,MyHC1)적전장cDNA,병운용생물신식학적방법대기진행분석,실시형광정량PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)검측MyHC1기인재아배태기적표체정황.연구결과표명,아MyHC1기인(GenBank등록호:KM675469)cDNA전장6028 bp,포함5 823 bp적개방성열독광,57 bp적5'단비편마구화148 bp적3'단비편마구,공편마1 940개안기산.경예측,아MyHC1기인편마적단백질유31 478개원자조성,분자식위C9746H15817N2753O3096S66,상대분자질량위223kD,등전점위5.62,평균친수성위-0.786,속우불은정친수단백.재선예측아화계(Gallus gallus)적MyHC1단백질삼유결구정고도상사,유다라선화절첩편취집성구상두부,병대유장섬유상α-라선미부.아MyHC1적편마구(coding sequence,CDS)서렬여계적동원성최고,위92.86％,여포유류동원성다수재84％좌우,여량서류동원성상대교저.아여계안기산동원성최고,위96.45％,여포유류적동원성다수재90％좌우,여비주조와(Xenopus laevis)동원성교저,위78.13％.계통진화수분석표명,포유동물형성일개대분지,량서류자성일지,아화홍원계취성일지,분자진화지위적관계최근,험증료아화계속우근연물충.qRT-PCR검측도MyHC1기인재배태기제7천개시표체,이후표체량축점승고,재15d표체량체도고봉후하강,25 d지후축점추우평은,표명,MyHC1기인재아배태기mRNA수평적표체량정선상승재하강적추세.본연구수차획득료아MyHC1적전장cDNA서렬、분자적결구특점화표체특정,현시해기인재아기육생장발육과정기중요작용,위해기인적공능급아육질성상연구제공료기출자료.
