神经疾病与精神卫生
神經疾病與精神衛生
신경질병여정신위생
NERVOUS DISEASES AND MENTAL HYGIENE
2015年
1期
15-21,封3
,共8页
刘敏%马建芳%刘晓黎%汤荟冬
劉敏%馬建芳%劉曉黎%湯薈鼕
류민%마건방%류효려%탕회동
阿尔茨海默病%自噬%C31%LC3
阿爾茨海默病%自噬%C31%LC3
아이자해묵병%자서%C31%LC3
Autophagy%Alzheimer disease%C31%LC3
目的 探讨β淀粉样前体蛋白羧基端短肽C31的毒性作用和自噬的关系,以及自噬是否介导C31的清除.方法 首先构建p3 xFLAG—CMV—10—mCherry-C31(C31)质粒和p3xFLAG-CMV-10-mCherry(Vector)质粒(对照),采用脂质体转染法转染入SH-SY5Y和APPsw稳转的HEK293(APPsw HEK293)细胞系中,并通过Western blot方法验证其表达;采用MTT法检测C31和Vector质粒瞬时转染48 h后的细胞存活率;分别予以不同的自噬调节药物,Western blot检测自噬相关蛋白(LC3)和C31水平.最后,通过免疫共沉淀法检测C31是否可以和LC3结合,并采用免疫荧光检测C31是否可以与LC3共定位,以进一步验证自噬是否为介导C31降解的关键途径.结果 在SH-SY5Y和APPsw HEK293细胞系中,C31质粒转染组细胞活力显著低于对照组(P＜0.05);转染C31组与对照组自噬水平无明显差异;促自噬情况下(雷帕霉素和饥饿处理),LC3—Ⅱ的水平比未加药处理组略增高,但未达到统计学意义,C31水平相对于空载水平差异无统计学意义;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用于APPsw HEK293细胞后,LC3—Ⅱ水平有轻度降低,但未达到统计学意义,C31水平改变也未达到统计学意义;加入自噬体和溶酶体融合抑制剂氯喹(CQ)和氯化铵(NH4Cl)后,细胞自噬水平有明显的增高,且CQ的作用最为明显,C31水平相对于空载水平明显增高(P＜0.05).在SH—SY5Y细胞中,结果类似,但CQ和NH4Cl作用后,C31水平相对于空载水平无统计学差异.免疫荧光显示C31通过与自噬相关蛋白LC3结合,从而锚定到自噬体上,而参与到自噬代谢过程.结论 C31在SH-SY5Y细胞和APPsw HEK293细胞中均能产生细胞毒性作用.过表达C31不改变细胞的自噬水平.自噬途径介导C31的清除,表明自噬可能在阿尔茨海默病中起到保护作用.
目的 探討β澱粉樣前體蛋白羧基耑短肽C31的毒性作用和自噬的關繫,以及自噬是否介導C31的清除.方法 首先構建p3 xFLAG—CMV—10—mCherry-C31(C31)質粒和p3xFLAG-CMV-10-mCherry(Vector)質粒(對照),採用脂質體轉染法轉染入SH-SY5Y和APPsw穩轉的HEK293(APPsw HEK293)細胞繫中,併通過Western blot方法驗證其錶達;採用MTT法檢測C31和Vector質粒瞬時轉染48 h後的細胞存活率;分彆予以不同的自噬調節藥物,Western blot檢測自噬相關蛋白(LC3)和C31水平.最後,通過免疫共沉澱法檢測C31是否可以和LC3結閤,併採用免疫熒光檢測C31是否可以與LC3共定位,以進一步驗證自噬是否為介導C31降解的關鍵途徑.結果 在SH-SY5Y和APPsw HEK293細胞繫中,C31質粒轉染組細胞活力顯著低于對照組(P＜0.05);轉染C31組與對照組自噬水平無明顯差異;促自噬情況下(雷帕黴素和饑餓處理),LC3—Ⅱ的水平比未加藥處理組略增高,但未達到統計學意義,C31水平相對于空載水平差異無統計學意義;自噬抑製劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用于APPsw HEK293細胞後,LC3—Ⅱ水平有輕度降低,但未達到統計學意義,C31水平改變也未達到統計學意義;加入自噬體和溶酶體融閤抑製劑氯喹(CQ)和氯化銨(NH4Cl)後,細胞自噬水平有明顯的增高,且CQ的作用最為明顯,C31水平相對于空載水平明顯增高(P＜0.05).在SH—SY5Y細胞中,結果類似,但CQ和NH4Cl作用後,C31水平相對于空載水平無統計學差異.免疫熒光顯示C31通過與自噬相關蛋白LC3結閤,從而錨定到自噬體上,而參與到自噬代謝過程.結論 C31在SH-SY5Y細胞和APPsw HEK293細胞中均能產生細胞毒性作用.過錶達C31不改變細胞的自噬水平.自噬途徑介導C31的清除,錶明自噬可能在阿爾茨海默病中起到保護作用.
목적 탐토β정분양전체단백최기단단태C31적독성작용화자서적관계,이급자서시부개도C31적청제.방법 수선구건p3 xFLAG—CMV—10—mCherry-C31(C31)질립화p3xFLAG-CMV-10-mCherry(Vector)질립(대조),채용지질체전염법전염입SH-SY5Y화APPsw은전적HEK293(APPsw HEK293)세포계중,병통과Western blot방법험증기표체;채용MTT법검측C31화Vector질립순시전염48 h후적세포존활솔;분별여이불동적자서조절약물,Western blot검측자서상관단백(LC3)화C31수평.최후,통과면역공침정법검측C31시부가이화LC3결합,병채용면역형광검측C31시부가이여LC3공정위,이진일보험증자서시부위개도C31강해적관건도경.결과 재SH-SY5Y화APPsw HEK293세포계중,C31질립전염조세포활력현저저우대조조(P＜0.05);전염C31조여대조조자서수평무명현차이;촉자서정황하(뢰파매소화기아처리),LC3—Ⅱ적수평비미가약처리조략증고,단미체도통계학의의,C31수평상대우공재수평차이무통계학의의;자서억제제3-갑기선표령(3-MA)작용우APPsw HEK293세포후,LC3—Ⅱ수평유경도강저,단미체도통계학의의,C31수평개변야미체도통계학의의;가입자서체화용매체융합억제제록규(CQ)화록화안(NH4Cl)후,세포자서수평유명현적증고,차CQ적작용최위명현,C31수평상대우공재수평명현증고(P＜0.05).재SH—SY5Y세포중,결과유사,단CQ화NH4Cl작용후,C31수평상대우공재수평무통계학차이.면역형광현시C31통과여자서상관단백LC3결합,종이묘정도자서체상,이삼여도자서대사과정.결론 C31재SH-SY5Y세포화APPsw HEK293세포중균능산생세포독성작용.과표체C31불개변세포적자서수평.자서도경개도C31적청제,표명자서가능재아이자해묵병중기도보호작용.
