南京林业大学学报（自然科学版）
南京林業大學學報（自然科學版）
남경임업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2015年
1期
167-172
,共6页
栎属植物%成熟叶片%流式细胞术%细胞核分离缓冲液
櫟屬植物%成熟葉片%流式細胞術%細胞覈分離緩遲液
력속식물%성숙협편%류식세포술%세포핵분리완충액
Quercus%mature leaf%flow cytometry%nuclear isolation buffers
为建立适于栎属植物的流式细胞核实验体系,分别利用Tris-MgCl2 Galbraith's、Marie's和Otto's细胞核分离缓冲液对麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎制备细胞核悬浮液.检验发现:Tris-MgCl2 Galbraith's缓冲液所制备样品未能检测出DNA峰,Otto's缓冲液制备的样品中,除白栎外其他3个样品的测试结果均较差,Marie's缓冲液所制备的4个样品测试DNA峰的变异系数(CV)均大于10％.采用正交设计方法对经典Marie's缓冲液中的β-巯基乙醇和Tween 20组分进行了优化,发现麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎的最适B-巯基乙醇浓度和Tween 20体积比分别为45 mmol/L和2.5％、15 mmol/L和2.0％、60 mmol/L和1.0％及30 mmol/L和1.0％.运用改进后的最适Marie's缓冲液进行流式细胞核测定,4种样品的变异系数均显著下降(在3.52％ ～4.81％之间),表明改进后的Marie's缓冲液对4种栎属植物的测试结果准确可信.
為建立適于櫟屬植物的流式細胞覈實驗體繫,分彆利用Tris-MgCl2 Galbraith's、Marie's和Otto's細胞覈分離緩遲液對痳櫟、栓皮櫟、白櫟和短柄枹櫟製備細胞覈懸浮液.檢驗髮現:Tris-MgCl2 Galbraith's緩遲液所製備樣品未能檢測齣DNA峰,Otto's緩遲液製備的樣品中,除白櫟外其他3箇樣品的測試結果均較差,Marie's緩遲液所製備的4箇樣品測試DNA峰的變異繫數(CV)均大于10％.採用正交設計方法對經典Marie's緩遲液中的β-巰基乙醇和Tween 20組分進行瞭優化,髮現痳櫟、栓皮櫟、白櫟和短柄枹櫟的最適B-巰基乙醇濃度和Tween 20體積比分彆為45 mmol/L和2.5％、15 mmol/L和2.0％、60 mmol/L和1.0％及30 mmol/L和1.0％.運用改進後的最適Marie's緩遲液進行流式細胞覈測定,4種樣品的變異繫數均顯著下降(在3.52％ ～4.81％之間),錶明改進後的Marie's緩遲液對4種櫟屬植物的測試結果準確可信.
위건립괄우력속식물적류식세포핵실험체계,분별이용Tris-MgCl2 Galbraith's、Marie's화Otto's세포핵분리완충액대마력、전피력、백력화단병포력제비세포핵현부액.검험발현:Tris-MgCl2 Galbraith's완충액소제비양품미능검측출DNA봉,Otto's완충액제비적양품중,제백력외기타3개양품적측시결과균교차,Marie's완충액소제비적4개양품측시DNA봉적변이계수(CV)균대우10％.채용정교설계방법대경전Marie's완충액중적β-구기을순화Tween 20조분진행료우화,발현마력、전피력、백력화단병포력적최괄B-구기을순농도화Tween 20체적비분별위45 mmol/L화2.5％、15 mmol/L화2.0％、60 mmol/L화1.0％급30 mmol/L화1.0％.운용개진후적최괄Marie's완충액진행류식세포핵측정,4충양품적변이계수균현저하강(재3.52％ ～4.81％지간),표명개진후적Marie's완충액대4충력속식물적측시결과준학가신.
