湖北农业科学
湖北農業科學
호북농업과학
2014年
22期
5474-5477,5525
,共5页
余波%周思旋%谭诗文%徐景峨%史开志%杨莉
餘波%週思鏇%譚詩文%徐景峨%史開誌%楊莉
여파%주사선%담시문%서경아%사개지%양리
猪圆环病毒2型%ORF2基因%SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR
豬圓環病毒2型%ORF2基因%SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR
저원배병독2형%ORF2기인%SYBR Green Ⅰ형광정량PCR
PCV-2%ORF2 gene%SYBR Green Ⅰ real-time quantitative PCR
根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列设计特异性引物,PCR扩增获得猪圆环病毒2型ORF2基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪圆环病毒2型的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法.扩增产物的溶解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PPV、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号,可重复性好,测灵敏度可达4.0×101拷贝/μL.结果表明,建立的猪圆环病毒2型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有特异、灵敏、快速、重复性好,适合于猪圆环病毒2型临床样品的检测.
根據GenBank中豬圓環病毒2型ORF2基因序列設計特異性引物,PCR擴增穫得豬圓環病毒2型ORF2基因片段,併剋隆到pMD-18T載體上作為暘性標準品.通過對SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR反應條件的優化,建立瞭豬圓環病毒2型的SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR診斷方法.擴增產物的溶解麯線分析隻齣現1箇單特異峰,無引物二聚體,對PRV、PPV、E.coli、CSFV、PRRSV均無暘性信號,可重複性好,測靈敏度可達4.0×101拷貝/μL.結果錶明,建立的豬圓環病毒2型SYBR Green Ⅰ實時熒光定量PCR具有特異、靈敏、快速、重複性好,適閤于豬圓環病毒2型臨床樣品的檢測.
근거GenBank중저원배병독2형ORF2기인서렬설계특이성인물,PCR확증획득저원배병독2형ORF2기인편단,병극륭도pMD-18T재체상작위양성표준품.통과대SYBR Green Ⅰ형광정량PCR반응조건적우화,건립료저원배병독2형적SYBR Green Ⅰ형광정량PCR진단방법.확증산물적용해곡선분석지출현1개단특이봉,무인물이취체,대PRV、PPV、E.coli、CSFV、PRRSV균무양성신호,가중복성호,측령민도가체4.0×101고패/μL.결과표명,건립적저원배병독2형SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR구유특이、령민、쾌속、중복성호,괄합우저원배병독2형림상양품적검측.
