CAJ | 학술논문

根据GenBank中龚地弓形虫529 bp重复序列设计引物,以弓形虫RH株基因组DNA为模板,常规PCR扩增出长度212 bp的特异性保守序列,将其克隆到pGEM-T Easy载体中构建重组质粒标准品;以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立弓形虫荧光定量PCR检测方法.将该方法用于临床病死猪的弓形虫检测.结果表明:用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,溶解曲线特异相关系数0.997,平均试验间变异系数2.30％,能检出约0.05个速殖子;检测弓形虫YZ-1株与YZ-2株均为阳性,而检测水牛梭形肉孢子虫、犬等孢球虫、柔嫩艾美耳球虫基因组DNA均为阴性;检测24头病死猪,弓形虫阳性率为70.8％,略高于常规PCR方法的检出率(66.7％),但检测的69个组织样品中,荧光定量PCR方法的检出率(50.7％)明显高于常规PCR方法的检出率(34.8％).
근거GenBank중공지궁형충529 bp중복서렬설계인물,이궁형충RH주기인조DNA위모판,상규PCR확증출장도212 bp적특이성보수서렬,장기극륭도pGEM-T Easy재체중구건중조질립표준품;이10배배비희석적질립표준품위모판,진행SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR확증병제작표준곡선,건립궁형충형광정량PCR검측방법.장해방법용우림상병사저적궁형충검측.결과표명:용중조질립제작적표준곡선순배역치여모판농도유량호적선성관계,용해곡선특이상관계수0.997,평균시험간변이계수2.30％,능검출약0.05개속식자;검측궁형충YZ-1주여YZ-2주균위양성,이검측수우사형육포자충、견등포구충、유눈애미이구충기인조DNA균위음성;검측24두병사저,궁형충양성솔위70.8％,략고우상규PCR방법적검출솔(66.7％),단검측적69개조직양품중,형광정량PCR방법적검출솔(50.7％)명현고우상규PCR방법적검출솔(34.8％).