河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
12期
140-143
,共4页
张澍%王燕华%郭保党%冀君%吕慧芳%胡小敏%姚伦广
張澍%王燕華%郭保黨%冀君%呂慧芳%鬍小敏%姚倫廣
장주%왕연화%곽보당%기군%려혜방%호소민%요륜엄
胸腺肽β4基因%胸腺肽β15基因%表达%纯化%E玫瑰花环试验
胸腺肽β4基因%胸腺肽β15基因%錶達%純化%E玫瑰花環試驗
흉선태β4기인%흉선태β15기인%표체%순화%E매괴화배시험
thymosin β4 gene%thymosin β15 gene%expression%purification%E rosette test
为获得具有生物学活性的鸡胸腺肽β4、β15,根据大肠杆菌密码子偏爱性,设计合成鸡胸腺肽Tβ4、Tβ15基因片段,采用重叠PCR获得完整的Tβ4、Tβ15基因,将其连接到pET-28 a(+)载体上,转化至大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定,应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用E玫瑰花环试验测定其生物学活性.结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pET28a-Tβ4和pET28a-Tβ15,目的蛋白在大肠杆菌中大量可溶性表达,蛋白质分子量大小均为6 kD,镍柱亲和层析获得了纯化的蛋白质.E玫瑰花环试验结果显示,重组Tβ4的活力为35.5％,Tβ15的活力为18.7％,均能够明显增强T淋巴细胞的活性.表明Tβ4和Tβ15基因得到成功表达和纯化,并具有良好的生物学活性.
為穫得具有生物學活性的鷄胸腺肽β4、β15,根據大腸桿菌密碼子偏愛性,設計閤成鷄胸腺肽Tβ4、Tβ15基因片段,採用重疊PCR穫得完整的Tβ4、Tβ15基因,將其連接到pET-28 a(+)載體上,轉化至大腸桿菌BL21 (DE3)進行誘導錶達,經SDS-PAGE鑒定,應用鎳柱親和層析純化蛋白質,採用E玫瑰花環試驗測定其生物學活性.結果顯示,成功構建大腸桿菌錶達載體pET28a-Tβ4和pET28a-Tβ15,目的蛋白在大腸桿菌中大量可溶性錶達,蛋白質分子量大小均為6 kD,鎳柱親和層析穫得瞭純化的蛋白質.E玫瑰花環試驗結果顯示,重組Tβ4的活力為35.5％,Tβ15的活力為18.7％,均能夠明顯增彊T淋巴細胞的活性.錶明Tβ4和Tβ15基因得到成功錶達和純化,併具有良好的生物學活性.
위획득구유생물학활성적계흉선태β4、β15,근거대장간균밀마자편애성,설계합성계흉선태Tβ4、Tβ15기인편단,채용중첩PCR획득완정적Tβ4、Tβ15기인,장기련접도pET-28 a(+)재체상,전화지대장간균BL21 (DE3)진행유도표체,경SDS-PAGE감정,응용얼주친화층석순화단백질,채용E매괴화배시험측정기생물학활성.결과현시,성공구건대장간균표체재체pET28a-Tβ4화pET28a-Tβ15,목적단백재대장간균중대량가용성표체,단백질분자량대소균위6 kD,얼주친화층석획득료순화적단백질.E매괴화배시험결과현시,중조Tβ4적활력위35.5％,Tβ15적활력위18.7％,균능구명현증강T림파세포적활성.표명Tβ4화Tβ15기인득도성공표체화순화,병구유량호적생물학활성.
