河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
12期
134-139
,共6页
范璐%王丽%史西保%樊剑鸣%王爱萍%张改平
範璐%王麗%史西保%樊劍鳴%王愛萍%張改平
범로%왕려%사서보%번검명%왕애평%장개평
RNA干扰%牛病毒性腹泻病毒%短发夹RNA%单克隆细胞系%复制
RNA榦擾%牛病毒性腹瀉病毒%短髮夾RNA%單剋隆細胞繫%複製
RNA간우%우병독성복사병독%단발협RNA%단극륭세포계%복제
RNA interference%bovine viral diarrhea virus (BVDV)%shRNA%monoclonal cell lines%replication
为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK 细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSGH1-1083 和subclonepSGH1-8235及对照细胞系subclonepshmock.通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID50及RT-PCR、流式细胞术检测BVDV shRNA细胞系对BVDV复制的影响.结果表明,与阴性对照组相比,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV 72 h后CPE不明显,其TCID50低于阴性对照组;RT-PCR结果显示,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱;流式细胞术检测不同细胞系接毒24 h后的结合率,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235与病毒结合率分别为11.37％和11.51％,与对照组(20.25％)相比有所降低.综上,稳定转染BVDV shRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235对BVDV的复制具有抑制作用.
為研究靶嚮牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的shRNA對BVDV複製的影響,利用脂質體介導法將BVDV shRNA真覈錶達質粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及對照質粒pSGH1轉染MDBK 細胞,通過G418抗性以及有限稀釋法篩選穫得BVDV shRNA單剋隆細胞繫subclonepSGH1-1083 和subclonepSGH1-8235及對照細胞繫subclonepshmock.通過觀察其細胞病變效應(CPE)、測定TCID50及RT-PCR、流式細胞術檢測BVDV shRNA細胞繫對BVDV複製的影響.結果錶明,與陰性對照組相比,單剋隆細胞繫subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的細胞在感染BVDV 72 h後CPE不明顯,其TCID50低于陰性對照組;RT-PCR結果顯示,單剋隆細胞繫subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的細胞在感染BVDV後病毒E2基因的錶達減弱;流式細胞術檢測不同細胞繫接毒24 h後的結閤率,單剋隆細胞繫subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235與病毒結閤率分彆為11.37％和11.51％,與對照組(20.25％)相比有所降低.綜上,穩定轉染BVDV shRNA的單剋隆細胞繫subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235對BVDV的複製具有抑製作用.
위연구파향우병독성복사병독(BVDV)적shRNA대BVDV복제적영향,이용지질체개도법장BVDV shRNA진핵표체질립pSGH1-sh1083화pSGH1-sh8235급대조질립pSGH1전염MDBK 세포,통과G418항성이급유한희석법사선획득BVDV shRNA단극륭세포계subclonepSGH1-1083 화subclonepSGH1-8235급대조세포계subclonepshmock.통과관찰기세포병변효응(CPE)、측정TCID50급RT-PCR、류식세포술검측BVDV shRNA세포계대BVDV복제적영향.결과표명,여음성대조조상비,단극륭세포계subclonepSGH1-1083화subclonepSGH1-8235적세포재감염BVDV 72 h후CPE불명현,기TCID50저우음성대조조;RT-PCR결과현시,단극륭세포계subclonepSGH1-1083화subclonepSGH1-8235적세포재감염BVDV후병독E2기인적표체감약;류식세포술검측불동세포계접독24 h후적결합솔,단극륭세포계subclonepSGH1-1083화subclonepSGH1-8235여병독결합솔분별위11.37％화11.51％,여대조조(20.25％)상비유소강저.종상,은정전염BVDV shRNA적단극륭세포계subclonepSGH1-1083화subclonepSGH1-8235대BVDV적복제구유억제작용.
