中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2014年
12期
16-19
,共4页
陈欣%尹燕博%张乐萃%卢春晓
陳訢%尹燕博%張樂萃%盧春曉
진흔%윤연박%장악췌%로춘효
H9N2亚型禽流感%HA基因%NA基因%M基因%多重RT-PCR
H9N2亞型禽流感%HA基因%NA基因%M基因%多重RT-PCR
H9N2아형금류감%HA기인%NA기인%M기인%다중RT-PCR
为建立H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,参考GenBank登录的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA、M基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计3对可扩增HA、NA、M基因的特异性引物以及反转录引物.3对引物扩增的cDNA片段大小分别为1 742、1 410、1 027 bp.结果:通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,与目的片段大小相符的片段,经测序均正确,且与其他常见禽病病原不存在交叉反应.该方法对HA基因的最低检出量为10-2 μg/μL cDNA,对NA基因的最低检出量为10-2μg/μL cDNA,对M基因的最低检出量为10-3 μg/μL cDNA.通过对30份H9N2阳性病毒液进行三重PCR,均可同时扩出HA、NA、M基因.结果表明,本试验建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,为提高H9N2亚型禽流感病毒HA、NA、M基因序列分析的效率奠定基础.
為建立H9N2亞型禽流感病毒三重RT-PCR診斷技術,參攷GenBank登錄的H9N2亞型禽流感病毒(AIV)的HA、NA、M基因序列,利用Primer Premier5.0軟件設計3對可擴增HA、NA、M基因的特異性引物以及反轉錄引物.3對引物擴增的cDNA片段大小分彆為1 742、1 410、1 027 bp.結果:通過對多重RT-PCR擴增條件的優化,建立瞭H9N2亞型禽流感病毒三重RT-PCR診斷技術,與目的片段大小相符的片段,經測序均正確,且與其他常見禽病病原不存在交扠反應.該方法對HA基因的最低檢齣量為10-2 μg/μL cDNA,對NA基因的最低檢齣量為10-2μg/μL cDNA,對M基因的最低檢齣量為10-3 μg/μL cDNA.通過對30份H9N2暘性病毒液進行三重PCR,均可同時擴齣HA、NA、M基因.結果錶明,本試驗建立瞭H9N2亞型禽流感病毒三重RT-PCR診斷技術,為提高H9N2亞型禽流感病毒HA、NA、M基因序列分析的效率奠定基礎.
위건립H9N2아형금류감병독삼중RT-PCR진단기술,삼고GenBank등록적H9N2아형금류감병독(AIV)적HA、NA、M기인서렬,이용Primer Premier5.0연건설계3대가확증HA、NA、M기인적특이성인물이급반전록인물.3대인물확증적cDNA편단대소분별위1 742、1 410、1 027 bp.결과:통과대다중RT-PCR확증조건적우화,건립료H9N2아형금류감병독삼중RT-PCR진단기술,여목적편단대소상부적편단,경측서균정학,차여기타상견금병병원불존재교차반응.해방법대HA기인적최저검출량위10-2 μg/μL cDNA,대NA기인적최저검출량위10-2μg/μL cDNA,대M기인적최저검출량위10-3 μg/μL cDNA.통과대30빈H9N2양성병독액진행삼중PCR,균가동시확출HA、NA、M기인.결과표명,본시험건립료H9N2아형금류감병독삼중RT-PCR진단기술,위제고H9N2아형금류감병독HA、NA、M기인서렬분석적효솔전정기출.
