CAJ | 학술논문

目的:研究细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrin β4水解机制.方法:常规培养高密度和低密度MCF7乳腺癌细胞,分别给予钙离子螯合剂和肝素处理,用Western blot检测不同培养密度MCF7细胞integrinβ4的水解情况;用Fluo-3 AM作为钙离子荧光探针,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子的分布.结果:Western blot检测结果显示,在低密度和高密度培养的MCF7细胞中,integrin β4的水解模式不同;在高浓度培养的细胞中,200 kD integrin β4片段产生增多;激光共聚焦扫描显微镜观察发现,低密度培养MCF7细胞中,钙离子的绿色荧光主要成团或颗粒状分布,而且与红色荧光有较多的重合,部分钙离子分布于细胞核内;在高密度培养的细胞中,钙离子在细胞质膜和细胞核中的定位较少;钙离子螯合剂BAPTA-AM处理可使200 kD integrin β4明显减少;10-6 mol/L的肝素能够减少MCF7细胞200 kD水解片段的增多,随着肝素浓度的增高,抑制效果有所增强;相对于BAPTA-AM,10-4mol/L肝素的抑制效应减弱.结论:高密度培养的MCF7细胞中,钙离子从钙库中释放,细胞外内流增多,激活calpain 2,导致200 kD integrinβ4水解片段增多.
목적:연구세포배양밀도대MCF7유선암세포integrin β4수해궤제.방법:상규배양고밀도화저밀도MCF7유선암세포,분별급여개리자오합제화간소처리,용Western blot검측불동배양밀도MCF7세포integrinβ4적수해정황;용Fluo-3 AM작위개리자형광탐침,격광공취초소묘현미경검측세포내개리자적분포.결과:Western blot검측결과현시,재저밀도화고밀도배양적MCF7세포중,integrin β4적수해모식불동;재고농도배양적세포중,200 kD integrin β4편단산생증다;격광공취초소묘현미경관찰발현,저밀도배양MCF7세포중,개리자적록색형광주요성단혹과립상분포,이차여홍색형광유교다적중합,부분개리자분포우세포핵내;재고밀도배양적세포중,개리자재세포질막화세포핵중적정위교소;개리자오합제BAPTA-AM처리가사200 kD integrin β4명현감소;10-6 mol/L적간소능구감소MCF7세포200 kD수해편단적증다,수착간소농도적증고,억제효과유소증강;상대우BAPTA-AM,10-4mol/L간소적억제효응감약.결론:고밀도배양적MCF7세포중,개리자종개고중석방,세포외내류증다,격활calpain 2,도치200 kD integrinβ4수해편단증다.