中国脊柱脊髓杂志
中國脊柱脊髓雜誌
중국척주척수잡지
CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD
2014年
12期
1090-1098
,共9页
王天仪%原文琦%刘勇%张衍军%张亮%王志杰%曹建刚%冯世庆
王天儀%原文琦%劉勇%張衍軍%張亮%王誌傑%曹建剛%馮世慶
왕천의%원문기%류용%장연군%장량%왕지걸%조건강%풍세경
坐骨神经预损伤%脊髓后索损伤%miRNA%Dusp4%p38蛋白%大鼠
坐骨神經預損傷%脊髓後索損傷%miRNA%Dusp4%p38蛋白%大鼠
좌골신경예손상%척수후색손상%miRNA%Dusp4%p38단백%대서
Sciatic nerve conditioning injury%Dorsal column lesion%miRNA%Dusp4%p38 protein%Rat
目的:研究大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中miRNomes改变对脊髓后索损伤修复的影响.方法:39只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D组.A组(n=12)坐骨神经损伤造模后7d进行T10节段脊髓后索损伤造模,B组(n=12)仅进行T10节段脊髓后索损伤造模,C组(n=12)仅进行坐骨神经损伤造模,D组(n=3)不进行任何造模操作.A组和B组分别于脊髓后索损伤造模后4h、3d、7d、14d取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测,于脊髓后索损伤造模后14d取损伤中心脊髓组织行神经丝蛋白200(NF-200)免疫组织化学染色和HE染色;C组于A组各时间点取材的同时取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测;D组取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测.对A、B两组各时间点背根神经节miRNA表达谱进行微阵列芯片分析和生物信息学分析,观察与坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复有关的miRNA,选出A组中与B组相比变化倍数明显、经过生物信息学分析靶蛋白为Dusp4的miR-199a-5p进行研究.并用RT-qPCR技术对各组miR-199a-5p及A、B和D组Dusp4 mRNA表达进行检测,用Western blot技术检测各组Dusp4蛋白以及A、D组p38蛋白和p-p38蛋白,对A组和B组脊髓后索损伤中心脊髓组织用NF-200免疫组织化学染色及HE染色观察损伤脊髓的恢复情况.结果:芯片分析结果显示miR-199a-5p在A组各个时间点表达与D组相比明显下调,B组miR-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调,3d、7d和14d的表达量无明显变化.RT-qPCR结果显示A组各时间点miR-199a-5p表达与D组相比下调(P＜0.05),B组miR-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调(P＜0.05),3d、7d和14d的表达量与D组比较无明显变化,C组各时间点miR-199a-5p表达与D组比较无明显变化.A组和B组各时间点Dusp4 mRNA表达与D组相比无明显变化.A组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后各个时间点与D组比较均有上调且存在统计学差异(P＜0.05).B组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比显著下调(P＜0.05),脊髓后索损伤后3d、7d、14d与D组比较无明显差异.C组Dusp4蛋白在各时间点的表达水平与D组比较无明显差异.A组p38蛋白及p-p38蛋白的表达变化趋势与miR-199a-5p趋势一致.在脊髓后索损伤后14d,与B组比较A组损伤中心尾端脊髓NF-200表达明显增加,且损伤中心尾端脊髓白质纤维束形态规整、后索纤维束排列有序.结论:大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中miR-199a-5p表达下调可以促进脊髓后索损伤的修复.
目的:研究大鼠坐骨神經預損傷後揹根神經節中miRNomes改變對脊髓後索損傷脩複的影響.方法:39隻雌性Wistar大鼠隨機分為A、B、C、D組.A組(n=12)坐骨神經損傷造模後7d進行T10節段脊髓後索損傷造模,B組(n=12)僅進行T10節段脊髓後索損傷造模,C組(n=12)僅進行坐骨神經損傷造模,D組(n=3)不進行任何造模操作.A組和B組分彆于脊髓後索損傷造模後4h、3d、7d、14d取揹根神經節行總RNA提取和Western blot檢測,于脊髓後索損傷造模後14d取損傷中心脊髓組織行神經絲蛋白200(NF-200)免疫組織化學染色和HE染色;C組于A組各時間點取材的同時取揹根神經節行總RNA提取和Western blot檢測;D組取揹根神經節行總RNA提取和Western blot檢測.對A、B兩組各時間點揹根神經節miRNA錶達譜進行微陣列芯片分析和生物信息學分析,觀察與坐骨神經預損傷促進脊髓後索損傷脩複有關的miRNA,選齣A組中與B組相比變化倍數明顯、經過生物信息學分析靶蛋白為Dusp4的miR-199a-5p進行研究.併用RT-qPCR技術對各組miR-199a-5p及A、B和D組Dusp4 mRNA錶達進行檢測,用Western blot技術檢測各組Dusp4蛋白以及A、D組p38蛋白和p-p38蛋白,對A組和B組脊髓後索損傷中心脊髓組織用NF-200免疫組織化學染色及HE染色觀察損傷脊髓的恢複情況.結果:芯片分析結果顯示miR-199a-5p在A組各箇時間點錶達與D組相比明顯下調,B組miR-199a-5p在脊髓後索損傷後4h錶達與D組相比上調,3d、7d和14d的錶達量無明顯變化.RT-qPCR結果顯示A組各時間點miR-199a-5p錶達與D組相比下調(P＜0.05),B組miR-199a-5p在脊髓後索損傷後4h錶達與D組相比上調(P＜0.05),3d、7d和14d的錶達量與D組比較無明顯變化,C組各時間點miR-199a-5p錶達與D組比較無明顯變化.A組和B組各時間點Dusp4 mRNA錶達與D組相比無明顯變化.A組Dusp4蛋白在脊髓後索損傷後各箇時間點與D組比較均有上調且存在統計學差異(P＜0.05).B組Dusp4蛋白在脊髓後索損傷後4h錶達與D組相比顯著下調(P＜0.05),脊髓後索損傷後3d、7d、14d與D組比較無明顯差異.C組Dusp4蛋白在各時間點的錶達水平與D組比較無明顯差異.A組p38蛋白及p-p38蛋白的錶達變化趨勢與miR-199a-5p趨勢一緻.在脊髓後索損傷後14d,與B組比較A組損傷中心尾耑脊髓NF-200錶達明顯增加,且損傷中心尾耑脊髓白質纖維束形態規整、後索纖維束排列有序.結論:大鼠坐骨神經預損傷後揹根神經節中miR-199a-5p錶達下調可以促進脊髓後索損傷的脩複.
목적:연구대서좌골신경예손상후배근신경절중miRNomes개변대척수후색손상수복적영향.방법:39지자성Wistar대서수궤분위A、B、C、D조.A조(n=12)좌골신경손상조모후7d진행T10절단척수후색손상조모,B조(n=12)부진행T10절단척수후색손상조모,C조(n=12)부진행좌골신경손상조모,D조(n=3)불진행임하조모조작.A조화B조분별우척수후색손상조모후4h、3d、7d、14d취배근신경절행총RNA제취화Western blot검측,우척수후색손상조모후14d취손상중심척수조직행신경사단백200(NF-200)면역조직화학염색화HE염색;C조우A조각시간점취재적동시취배근신경절행총RNA제취화Western blot검측;D조취배근신경절행총RNA제취화Western blot검측.대A、B량조각시간점배근신경절miRNA표체보진행미진렬심편분석화생물신식학분석,관찰여좌골신경예손상촉진척수후색손상수복유관적miRNA,선출A조중여B조상비변화배수명현、경과생물신식학분석파단백위Dusp4적miR-199a-5p진행연구.병용RT-qPCR기술대각조miR-199a-5p급A、B화D조Dusp4 mRNA표체진행검측,용Western blot기술검측각조Dusp4단백이급A、D조p38단백화p-p38단백,대A조화B조척수후색손상중심척수조직용NF-200면역조직화학염색급HE염색관찰손상척수적회복정황.결과:심편분석결과현시miR-199a-5p재A조각개시간점표체여D조상비명현하조,B조miR-199a-5p재척수후색손상후4h표체여D조상비상조,3d、7d화14d적표체량무명현변화.RT-qPCR결과현시A조각시간점miR-199a-5p표체여D조상비하조(P＜0.05),B조miR-199a-5p재척수후색손상후4h표체여D조상비상조(P＜0.05),3d、7d화14d적표체량여D조비교무명현변화,C조각시간점miR-199a-5p표체여D조비교무명현변화.A조화B조각시간점Dusp4 mRNA표체여D조상비무명현변화.A조Dusp4단백재척수후색손상후각개시간점여D조비교균유상조차존재통계학차이(P＜0.05).B조Dusp4단백재척수후색손상후4h표체여D조상비현저하조(P＜0.05),척수후색손상후3d、7d、14d여D조비교무명현차이.C조Dusp4단백재각시간점적표체수평여D조비교무명현차이.A조p38단백급p-p38단백적표체변화추세여miR-199a-5p추세일치.재척수후색손상후14d,여B조비교A조손상중심미단척수NF-200표체명현증가,차손상중심미단척수백질섬유속형태규정、후색섬유속배렬유서.결론:대서좌골신경예손상후배근신경절중miR-199a-5p표체하조가이촉진척수후색손상적수복.
