中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2015年
2期
215-220
,共6页
陈松彪%李静%郁川%何雷%张春杰%程相朝%李银聚%颜云飞%金修哲%陈桂华%赵战勤
陳鬆彪%李靜%鬱川%何雷%張春傑%程相朝%李銀聚%顏雲飛%金脩哲%陳桂華%趙戰勤
진송표%리정%욱천%하뢰%장춘걸%정상조%리은취%안운비%금수철%진계화%조전근
鼠伤寒沙门菌SL1344%sipB基因%缺失株%生物学特性
鼠傷寒沙門菌SL1344%sipB基因%缺失株%生物學特性
서상한사문균SL1344%sipB기인%결실주%생물학특성
Salmonella typhimurium SL1344%sipB gene%Deleted mutant%Characteristics
目的：为了研制更加安全的鼠伤寒沙门菌弱毒株，本研究构建了鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsipB基因缺失突变株。方法：首先构建含缺失585 bp sipB基因的重组自杀性质粒PREΔsipB，利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术，两步法筛选出SL1344的sipB缺失株。结果：PCR及测序结果表明SL1344ΔsipB构建成功。进一步生物学特性研究表明，缺失株SL1344ΔsipB保留了亲本菌株SL1344的血清型1，4，5，12：i：1，2，且能够稳定遗传缺失585 bp的sipB基因，生长速度没有发生明显改变；但是，与亲本株SL1344相比，其毒力发生明显改变，缺失株SL1344ΔsipB口服感染6周龄BALB／c小鼠的LD50为1.70×108 CFU，毒力较亲本株SL1344降低至1.4％，免疫保护效力实验显示，对6周龄BALB／c小鼠免疫后第17天，鼠伤寒沙门菌野生株攻毒有50％的保护率。在给小鼠免疫后第14天血清抗体IgG达到最高。结论：结果表明，SL1344ΔsipB基因缺失株构建成功，遗传稳定，毒力明显降低，且具有较好的免疫原性，为研究鼠伤寒沙门菌sipB基因与其致病力之间的关系提供了方法，并为研制安全有效的沙门菌疫苗弱毒株奠定了基础。
目的：為瞭研製更加安全的鼠傷寒沙門菌弱毒株，本研究構建瞭鼠傷寒沙門菌SL1344ΔsipB基因缺失突變株。方法：首先構建含缺失585 bp sipB基因的重組自殺性質粒PREΔsipB，利用重組自殺性質粒介導的等位基因交換技術，兩步法篩選齣SL1344的sipB缺失株。結果：PCR及測序結果錶明SL1344ΔsipB構建成功。進一步生物學特性研究錶明，缺失株SL1344ΔsipB保留瞭親本菌株SL1344的血清型1，4，5，12：i：1，2，且能夠穩定遺傳缺失585 bp的sipB基因，生長速度沒有髮生明顯改變；但是，與親本株SL1344相比，其毒力髮生明顯改變，缺失株SL1344ΔsipB口服感染6週齡BALB／c小鼠的LD50為1.70×108 CFU，毒力較親本株SL1344降低至1.4％，免疫保護效力實驗顯示，對6週齡BALB／c小鼠免疫後第17天，鼠傷寒沙門菌野生株攻毒有50％的保護率。在給小鼠免疫後第14天血清抗體IgG達到最高。結論：結果錶明，SL1344ΔsipB基因缺失株構建成功，遺傳穩定，毒力明顯降低，且具有較好的免疫原性，為研究鼠傷寒沙門菌sipB基因與其緻病力之間的關繫提供瞭方法，併為研製安全有效的沙門菌疫苗弱毒株奠定瞭基礎。
목적：위료연제경가안전적서상한사문균약독주，본연구구건료서상한사문균SL1344ΔsipB기인결실돌변주。방법：수선구건함결실585 bp sipB기인적중조자살성질립PREΔsipB，이용중조자살성질립개도적등위기인교환기술，량보법사선출SL1344적sipB결실주。결과：PCR급측서결과표명SL1344ΔsipB구건성공。진일보생물학특성연구표명，결실주SL1344ΔsipB보류료친본균주SL1344적혈청형1，4，5，12：i：1，2，차능구은정유전결실585 bp적sipB기인，생장속도몰유발생명현개변；단시，여친본주SL1344상비，기독력발생명현개변，결실주SL1344ΔsipB구복감염6주령BALB／c소서적LD50위1.70×108 CFU，독력교친본주SL1344강저지1.4％，면역보호효력실험현시，대6주령BALB／c소서면역후제17천，서상한사문균야생주공독유50％적보호솔。재급소서면역후제14천혈청항체IgG체도최고。결론：결과표명，SL1344ΔsipB기인결실주구건성공，유전은정，독력명현강저，차구유교호적면역원성，위연구서상한사문균sipB기인여기치병력지간적관계제공료방법，병위연제안전유효적사문균역묘약독주전정료기출。
Objective:In order to develop a safer vaccine strain exploit Salmonella typhimurium vaccine strain .A ΔsipB mutant of Salmonella typhimurium SL 1344 strain was constructed.Methods: Firstly, the recombinant suicide plasmid containing the missing 585 bp sipB ( PREΔsipB ) was built by homologous recombination , and screenned by two-step method.Results: PCR and sequencing results showed that SL 1344ΔsipB was successfully constructed.It was no significant changes compared with SL 1344.But compared with the parent strains SL 1344 , the mutant strain had obvious change in its virulence , oral challenge of bacteria in mice revealed that LD50 of the mutant strain was 1.70 ×108 CFU,the toxicity reduced about 1.4%.The protection rate induced by the sipB mutant was 50%,and the serum antibody peaked 14 d post-immunization.Conclusion:The SL1344ΔsipB mutant was constructed suc-cessfully,and genetic stability ,significantly reduced virulence.The study provides a new approach for further study of the relationship between the gene and pathogenicity of Salmonella typhimurium.It is likely that the ΔsipB mutant could be adapted to develope attenuated Salmonella vaccine.
