解放军医学院学报
解放軍醫學院學報
해방군의학원학보
Academic Journal of Chinese Pla Medical School
2015年
2期
160-165
,共6页
张帆%司文%高旭东%冯帆%王春平%杨予涛%杨永平%杨俊兰
張帆%司文%高旭東%馮帆%王春平%楊予濤%楊永平%楊俊蘭
장범%사문%고욱동%풍범%왕춘평%양여도%양영평%양준란
细胞色素氧化酶3A4%孕烷X受体%萤光素酶报告基因%转录活性
細胞色素氧化酶3A4%孕烷X受體%螢光素酶報告基因%轉錄活性
세포색소양화매3A4%잉완X수체%형광소매보고기인%전록활성
cytochrome P-450 3A4%pregnane X receptor%luciferase reporters gene%transcriptional activity
目的 建立细胞色素氧化酶(cytochrome P-450,CYP)3A4启动子报告基因并在孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达阳性的肿瘤细胞中检测其转录活性.方法 利用PCR扩增CYP3A4的启动子区远端调控序列(-7836/-7208)和近端调控序列(-362/+52)序列;将上述序列克隆至pGL3-Promoter载体上;利用萤光素酶报告基因系统检测CYP 3A4报告基因的活性.结果 在肝癌细胞系中,PXR的激动剂利福平能够剂量依赖性地诱导远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和近端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.95;P=0.011)的活性,EC50为(5.65±0.58)μmol/L和(8.91±1.12)μ mol/L;PXR的拮抗剂酮康唑能够剂量依赖性地抑制利福平诱导的远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和PXRE-Luc(R2=0.92;P=0.003 4)活性,IC50为(0.55±0.08)μmol/L和(0.94±0.14)μmol/L.此外,多种化疗药物(PXR的潜在配体)能够在PXR阳性的肿瘤细胞系中诱导远端调控序列荧光素酶报告基因和近端调控序列荧光素酶报告基因的活性.结论 成功构建了CYP3A4启动子报告基因,在此基础上建立了在不同肿瘤细胞中检测PXR转录活性的方法.
目的 建立細胞色素氧化酶(cytochrome P-450,CYP)3A4啟動子報告基因併在孕烷X受體(pregnane X receptor,PXR)錶達暘性的腫瘤細胞中檢測其轉錄活性.方法 利用PCR擴增CYP3A4的啟動子區遠耑調控序列(-7836/-7208)和近耑調控序列(-362/+52)序列;將上述序列剋隆至pGL3-Promoter載體上;利用螢光素酶報告基因繫統檢測CYP 3A4報告基因的活性.結果 在肝癌細胞繫中,PXR的激動劑利福平能夠劑量依賴性地誘導遠耑調控序列熒光素酶報告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和近耑調控序列熒光素酶報告基因(R2=0.95;P=0.011)的活性,EC50為(5.65±0.58)μmol/L和(8.91±1.12)μ mol/L;PXR的拮抗劑酮康唑能夠劑量依賴性地抑製利福平誘導的遠耑調控序列熒光素酶報告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和PXRE-Luc(R2=0.92;P=0.003 4)活性,IC50為(0.55±0.08)μmol/L和(0.94±0.14)μmol/L.此外,多種化療藥物(PXR的潛在配體)能夠在PXR暘性的腫瘤細胞繫中誘導遠耑調控序列熒光素酶報告基因和近耑調控序列熒光素酶報告基因的活性.結論 成功構建瞭CYP3A4啟動子報告基因,在此基礎上建立瞭在不同腫瘤細胞中檢測PXR轉錄活性的方法.
목적 건립세포색소양화매(cytochrome P-450,CYP)3A4계동자보고기인병재잉완X수체(pregnane X receptor,PXR)표체양성적종류세포중검측기전록활성.방법 이용PCR확증CYP3A4적계동자구원단조공서렬(-7836/-7208)화근단조공서렬(-362/+52)서렬;장상술서렬극륭지pGL3-Promoter재체상;이용형광소매보고기인계통검측CYP 3A4보고기인적활성.결과 재간암세포계중,PXR적격동제리복평능구제량의뢰성지유도원단조공서렬형광소매보고기인(R2=0.92;P=0.003 4)화근단조공서렬형광소매보고기인(R2=0.95;P=0.011)적활성,EC50위(5.65±0.58)μmol/L화(8.91±1.12)μ mol/L;PXR적길항제동강서능구제량의뢰성지억제리복평유도적원단조공서렬형광소매보고기인(R2=0.92;P=0.003 4)화PXRE-Luc(R2=0.92;P=0.003 4)활성,IC50위(0.55±0.08)μmol/L화(0.94±0.14)μmol/L.차외,다충화료약물(PXR적잠재배체)능구재PXR양성적종류세포계중유도원단조공서렬형광소매보고기인화근단조공서렬형광소매보고기인적활성.결론 성공구건료CYP3A4계동자보고기인,재차기출상건립료재불동종류세포중검측PXR전록활성적방법.
