中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2015年
1期
13-16
,共4页
孟凡峰%范建华%徐步%时建蓬%董宣%崔治中%赵鹏
孟凡峰%範建華%徐步%時建蓬%董宣%崔治中%趙鵬
맹범봉%범건화%서보%시건봉%동선%최치중%조붕
J亚群禽白血病病毒%斑点杂交%间接免疫荧光试验%酶联免疫吸附试验%TCID50
J亞群禽白血病病毒%斑點雜交%間接免疫熒光試驗%酶聯免疫吸附試驗%TCID50
J아군금백혈병병독%반점잡교%간접면역형광시험%매련면역흡부시험%TCID50
为探索核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性,将ALV-J传染性克隆rNX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,在维持7d后收集细胞培养上清.上清液部分按照试剂盒说明书进行p27抗原的ELISA检测,另一部分提取RNA后以鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒进行Dot-blot检测,每孔中细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体进行IFA检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算三种方法测定的TCID50.结果显示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在确定病毒感染中能够相互验证和补充,该病毒在CEF的TCID50分别为10-4 7 TCID5dO.1 mL、10-5 2TCID5d0.1 mL和10-53TCID5d0.1 mL.表明采用Dot-blot法测定ALV-J的TCID50是可行的,不仅能够排除内源性的干扰,并且比ELISA和IFA具有更高的灵敏度.
為探索覈痠雜交技術在測定J亞群禽白血病病毒(ALV-J)細胞半數感染量(TCID50)中的可行性,將ALV-J傳染性剋隆rNX0101株以10倍梯度稀釋後按常規方法接種已長滿單層鷄胚成纖維細胞(CEF)的96孔闆,在維持7d後收集細胞培養上清.上清液部分按照試劑盒說明書進行p27抗原的ELISA檢測,另一部分提取RNA後以鷄緻病性外源性禽白血病病毒特異性覈痠探針交扠斑點雜交檢測試劑盒進行Dot-blot檢測,每孔中細胞固定後以ALV-J特異性單剋隆抗體進行IFA檢測,確定病毒感染孔後按照Reed-Muench法分彆計算三種方法測定的TCID50.結果顯示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在確定病毒感染中能夠相互驗證和補充,該病毒在CEF的TCID50分彆為10-4 7 TCID5dO.1 mL、10-5 2TCID5d0.1 mL和10-53TCID5d0.1 mL.錶明採用Dot-blot法測定ALV-J的TCID50是可行的,不僅能夠排除內源性的榦擾,併且比ELISA和IFA具有更高的靈敏度.
위탐색핵산잡교기술재측정J아군금백혈병병독(ALV-J)세포반수감염량(TCID50)중적가행성,장ALV-J전염성극륭rNX0101주이10배제도희석후안상규방법접충이장만단층계배성섬유세포(CEF)적96공판,재유지7d후수집세포배양상청.상청액부분안조시제합설명서진행p27항원적ELISA검측,령일부분제취RNA후이계치병성외원성금백혈병병독특이성핵산탐침교차반점잡교검측시제합진행Dot-blot검측,매공중세포고정후이ALV-J특이성단극륭항체진행IFA검측,학정병독감염공후안조Reed-Muench법분별계산삼충방법측정적TCID50.결과현시ELISA법、IFA법화Dot-blot법재학정병독감염중능구상호험증화보충,해병독재CEF적TCID50분별위10-4 7 TCID5dO.1 mL、10-5 2TCID5d0.1 mL화10-53TCID5d0.1 mL.표명채용Dot-blot법측정ALV-J적TCID50시가행적,불부능구배제내원성적간우,병차비ELISA화IFA구유경고적령민도.
