中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2014年
9期
33-37
,共5页
朱书宇%黄程新%胡启平%黄秒%舒伟%方玲
硃書宇%黃程新%鬍啟平%黃秒%舒偉%方玲
주서우%황정신%호계평%황초%서위%방령
蛇毒精氨酸酯酶%类凝血酶%Agkihpin%原核表达%克隆
蛇毒精氨痠酯酶%類凝血酶%Agkihpin%原覈錶達%剋隆
사독정안산지매%류응혈매%Agkihpin%원핵표체%극륭
snake venom arginine esterase%thrombin-like enzyme%Agkihpin%prokaryotic expression%clone
目的 构建蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin的原核表达载体,并诱导其表达重组Agkihpin,为将来量产Agkihpin提供方法和依据.方法 RT-PCR法扩增Agkihpin基因,构建重组表达质粒pET30a(+)-Agkihpin和pEASY-E1-His6-Agkihpin,并转化到BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳观察重组蛋白Agkihpin的表达情况,Western blot检测其特异性.结果 成功构建Agkihpin的原核表达载体pEASY-E1-His6-Agkihpin和pET30a(+)-Hiss-Agkihpin,并利用pEASY-E1-His6-Agkihpin首次在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子量约为30kD的His6-Agkihpin重组融合蛋白.结论 首次实现了His6-Agkihpin重组融合蛋白在原核系统中的高效表达,为Agkihpin将来量产提供了方法和实验依据.
目的 構建蛇毒精氨痠酯酶Agkihpin的原覈錶達載體,併誘導其錶達重組Agkihpin,為將來量產Agkihpin提供方法和依據.方法 RT-PCR法擴增Agkihpin基因,構建重組錶達質粒pET30a(+)-Agkihpin和pEASY-E1-His6-Agkihpin,併轉化到BL21(DE3)感受態細胞中進行誘導錶達,SDS-PAGE電泳觀察重組蛋白Agkihpin的錶達情況,Western blot檢測其特異性.結果 成功構建Agkihpin的原覈錶達載體pEASY-E1-His6-Agkihpin和pET30a(+)-Hiss-Agkihpin,併利用pEASY-E1-His6-Agkihpin首次在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達齣分子量約為30kD的His6-Agkihpin重組融閤蛋白.結論 首次實現瞭His6-Agkihpin重組融閤蛋白在原覈繫統中的高效錶達,為Agkihpin將來量產提供瞭方法和實驗依據.
목적 구건사독정안산지매Agkihpin적원핵표체재체,병유도기표체중조Agkihpin,위장래양산Agkihpin제공방법화의거.방법 RT-PCR법확증Agkihpin기인,구건중조표체질립pET30a(+)-Agkihpin화pEASY-E1-His6-Agkihpin,병전화도BL21(DE3)감수태세포중진행유도표체,SDS-PAGE전영관찰중조단백Agkihpin적표체정황,Western blot검측기특이성.결과 성공구건Agkihpin적원핵표체재체pEASY-E1-His6-Agkihpin화pET30a(+)-Hiss-Agkihpin,병이용pEASY-E1-His6-Agkihpin수차재대장간균BL21(DE3)중표체출분자량약위30kD적His6-Agkihpin중조융합단백.결론 수차실현료His6-Agkihpin중조융합단백재원핵계통중적고효표체,위Agkihpin장래양산제공료방법화실험의거.
