中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2014年
9期
1-5
,共5页
蔡文涛%林明侠%夏虹%陈安民%陈丽娟
蔡文濤%林明俠%夏虹%陳安民%陳麗娟
채문도%림명협%하홍%진안민%진려연
骨肉瘤%TG2%细胞色素C%Caspase-3%细胞凋亡
骨肉瘤%TG2%細胞色素C%Caspase-3%細胞凋亡
골육류%TG2%세포색소C%Caspase-3%세포조망
osteosarcoma%transgiutaminase 2%cytochrome C%Caspase-3%apoptosis
目的 探讨缺氧条件下,TG2在骨肉瘤MG-63细胞凋亡中的作用,以及TG2是否可通过阻止细胞色素C的释放和调节Caspase-3的表达及活性从而抑制细胞凋亡.方法 建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,分成常氧组、单纯缺氧组、对照siRNA缺氧组、TG2 siRNA缺氧组4组,观察比较各组在培养不同时相(6、12、24、48、72 h)骨肉瘤MG-63细胞中TG2、Caspase-3表达、胞核和胞浆细胞色素C的变化及细胞凋亡率.微量滴定板法检测TG2的活性;半定量RT-PCR方法检测TG2的mRNA水平;Western blot检测TG2、Caspase-3及细胞色素C蛋白表达情况;免疫组化(SP法)检测TG2蛋白在细胞内的分布;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与常氧组比较,单纯缺氧组及对照siRNA缺氧组的TG2活性、mRNA及蛋白表达水平均显著增强(P＜0.01),且随缺氧时间延长明显升高;Caspase-3活性未见明显增加,而Caspase-3及细胞胞浆内细胞色素C蛋白的表达水平和细胞凋亡率轻度增加.与前3组比较,TG2 siRNA缺氧组在通过转染TG2 siRNA抑制TG2的表达时,Caspase-3活性及胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均显著增强(P＜0.01);细胞凋亡率也显著增加(P＜0.01).结论 缺氧条件下,MG-63骨肉瘤细胞胞浆的TG2的活性、TG2mRNA及蛋白表达水平均明显升高,且随缺氧时间延长而逐渐增强;TG2可以阻止细胞核内细胞色素C向胞浆释放,降低Caspase-3的表达及活性,从而抑制肿瘤细胞凋亡.
目的 探討缺氧條件下,TG2在骨肉瘤MG-63細胞凋亡中的作用,以及TG2是否可通過阻止細胞色素C的釋放和調節Caspase-3的錶達及活性從而抑製細胞凋亡.方法 建立骨肉瘤細胞體外缺氧培養模型,分成常氧組、單純缺氧組、對照siRNA缺氧組、TG2 siRNA缺氧組4組,觀察比較各組在培養不同時相(6、12、24、48、72 h)骨肉瘤MG-63細胞中TG2、Caspase-3錶達、胞覈和胞漿細胞色素C的變化及細胞凋亡率.微量滴定闆法檢測TG2的活性;半定量RT-PCR方法檢測TG2的mRNA水平;Western blot檢測TG2、Caspase-3及細胞色素C蛋白錶達情況;免疫組化(SP法)檢測TG2蛋白在細胞內的分佈;流式細胞儀檢測細胞凋亡率.結果 與常氧組比較,單純缺氧組及對照siRNA缺氧組的TG2活性、mRNA及蛋白錶達水平均顯著增彊(P＜0.01),且隨缺氧時間延長明顯升高;Caspase-3活性未見明顯增加,而Caspase-3及細胞胞漿內細胞色素C蛋白的錶達水平和細胞凋亡率輕度增加.與前3組比較,TG2 siRNA缺氧組在通過轉染TG2 siRNA抑製TG2的錶達時,Caspase-3活性及胞漿內細胞色素C蛋白錶達水平均顯著增彊(P＜0.01);細胞凋亡率也顯著增加(P＜0.01).結論 缺氧條件下,MG-63骨肉瘤細胞胞漿的TG2的活性、TG2mRNA及蛋白錶達水平均明顯升高,且隨缺氧時間延長而逐漸增彊;TG2可以阻止細胞覈內細胞色素C嚮胞漿釋放,降低Caspase-3的錶達及活性,從而抑製腫瘤細胞凋亡.
목적 탐토결양조건하,TG2재골육류MG-63세포조망중적작용,이급TG2시부가통과조지세포색소C적석방화조절Caspase-3적표체급활성종이억제세포조망.방법 건립골육류세포체외결양배양모형,분성상양조、단순결양조、대조siRNA결양조、TG2 siRNA결양조4조,관찰비교각조재배양불동시상(6、12、24、48、72 h)골육류MG-63세포중TG2、Caspase-3표체、포핵화포장세포색소C적변화급세포조망솔.미량적정판법검측TG2적활성;반정량RT-PCR방법검측TG2적mRNA수평;Western blot검측TG2、Caspase-3급세포색소C단백표체정황;면역조화(SP법)검측TG2단백재세포내적분포;류식세포의검측세포조망솔.결과 여상양조비교,단순결양조급대조siRNA결양조적TG2활성、mRNA급단백표체수평균현저증강(P＜0.01),차수결양시간연장명현승고;Caspase-3활성미견명현증가,이Caspase-3급세포포장내세포색소C단백적표체수평화세포조망솔경도증가.여전3조비교,TG2 siRNA결양조재통과전염TG2 siRNA억제TG2적표체시,Caspase-3활성급포장내세포색소C단백표체수평균현저증강(P＜0.01);세포조망솔야현저증가(P＜0.01).결론 결양조건하,MG-63골육류세포포장적TG2적활성、TG2mRNA급단백표체수평균명현승고,차수결양시간연장이축점증강;TG2가이조지세포핵내세포색소C향포장석방,강저Caspase-3적표체급활성,종이억제종류세포조망.
