中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
1期
35-39
,共5页
rpoD基因%香鱼假单胞菌%荧光定量PCR%SYBR Green Ⅰ
rpoD基因%香魚假單胞菌%熒光定量PCR%SYBR Green Ⅰ
rpoD기인%향어가단포균%형광정량PCR%SYBR Green Ⅰ
rpoD gene%Pseudomonas plecoglossicida%real-time PCR%SYBR Green Ⅰ
为建立香鱼假单胞菌的快速定量检测方法,本研究根据GenBank中登录的rpoD基因序列设计了一对特异性引物,以该菌基因组DNA为模板通过PCR扩增其180 bp的ropD基因片段,并克隆于pMD18-T载体中,以纯化的重组质粒为标准品建立了香鱼假单胞菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.结果显示在1.9×103拷贝/μL～1.9× 1o8拷贝/μL范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.999,灵敏度可达1.9×103拷贝/μL;该方法对恶臭假单胞菌、荧光假单胞菌、创伤弧菌等病原菌DNA扩增结果均为阴性,特异性良好;组内和组间变异系数均小于2％,具有较高的重复性和稳定性.本研究建立的方法不仅能够快速检测香鱼假单胞菌,还能够对该病原菌感染的动态变化进行定量研究,为大黄鱼香鱼假单胞菌感染导致的内脏白点病的早期诊断及防控提供一个新的检测技术.
為建立香魚假單胞菌的快速定量檢測方法,本研究根據GenBank中登錄的rpoD基因序列設計瞭一對特異性引物,以該菌基因組DNA為模闆通過PCR擴增其180 bp的ropD基因片段,併剋隆于pMD18-T載體中,以純化的重組質粒為標準品建立瞭香魚假單胞菌SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法.結果顯示在1.9×103拷貝/μL～1.9× 1o8拷貝/μL範圍內呈現良好的線性關繫,相關繫數為0.999,靈敏度可達1.9×103拷貝/μL;該方法對噁臭假單胞菌、熒光假單胞菌、創傷弧菌等病原菌DNA擴增結果均為陰性,特異性良好;組內和組間變異繫數均小于2％,具有較高的重複性和穩定性.本研究建立的方法不僅能夠快速檢測香魚假單胞菌,還能夠對該病原菌感染的動態變化進行定量研究,為大黃魚香魚假單胞菌感染導緻的內髒白點病的早期診斷及防控提供一箇新的檢測技術.
위건립향어가단포균적쾌속정량검측방법,본연구근거GenBank중등록적rpoD기인서렬설계료일대특이성인물,이해균기인조DNA위모판통과PCR확증기180 bp적ropD기인편단,병극륭우pMD18-T재체중,이순화적중조질립위표준품건립료향어가단포균SYBR Green Ⅰ형광정량PCR검측방법.결과현시재1.9×103고패/μL～1.9× 1o8고패/μL범위내정현량호적선성관계,상관계수위0.999,령민도가체1.9×103고패/μL;해방법대악취가단포균、형광가단포균、창상호균등병원균DNA확증결과균위음성,특이성량호;조내화조간변이계수균소우2％,구유교고적중복성화은정성.본연구건립적방법불부능구쾌속검측향어가단포균,환능구대해병원균감염적동태변화진행정량연구,위대황어향어가단포균감염도치적내장백점병적조기진단급방공제공일개신적검측기술.
