中国实验方剂学杂志
中國實驗方劑學雜誌
중국실험방제학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE
2015年
2期
7-11
,共5页
刘少烽%陈晓东%朱爽%陈晓颖%钟兆健%章卫民%高晓霞
劉少烽%陳曉東%硃爽%陳曉穎%鐘兆健%章衛民%高曉霞
류소봉%진효동%주상%진효영%종조건%장위민%고효하
沉香%DNA提取%ITS2%聚合酶链式反应
沉香%DNA提取%ITS2%聚閤酶鏈式反應
침향%DNA제취%ITS2%취합매련식반응
Aquilariae Lignum Resinatum%DNA extraction%ITS2%polymerase chain reactions
目的:建立沉香的总DNA提取方法及rDNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系.方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2 P2扩增rDNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序.结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260nm/A280nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高.不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA＞引物＞Taq DNA聚合酶＞dNTP.最佳反应体系为20 μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-,dNTP 0.5 mmol·L-,TaqDNA聚合酶1.5U.测序获得的目前片段长度230 bp,与GenBank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100％.结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考.
目的:建立沉香的總DNA提取方法及rDNA第二內轉錄間隔區序列(ITS2)聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增體繫.方法:分彆採用改良的CTAB法、改良的CTAB法聯閤DNA提取試劑盒法及DNA提取試劑盒法提取沉香總DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2 P2擴增rDNA ITS2目的片段,通過正交試驗優選沉香的PCR擴增條件併對目的片段進行測序.結果:改良的CTAB法聯閤DNA提取試劑盒法提取總DNA的A260nm/A280nm1.79,質量濃度350 mg·L-1,PCR擴增目的片段產率最高.不同因素水平對沉香ITS2-PCR反應的影響順序為模闆DNA＞引物＞Taq DNA聚閤酶＞dNTP.最佳反應體繫為20 μL體繫,DNA模闆40 ng,引物0.2 mmol·L-,dNTP 0.5 mmol·L-,TaqDNA聚閤酶1.5U.測序穫得的目前片段長度230 bp,與GenBank中瑞香科沉香屬白木香序列相似性100％.結論:CTAB法聯閤DNA試劑盒法可簡單、快速穫得高質量沉香總DNA,正交試驗可快速穫得ITS2目的片段,為沉香的分子鑒定和繫統髮育分析提供參攷.
목적:건립침향적총DNA제취방법급rDNA제이내전록간격구서렬(ITS2)취합매련식반응(PCR)확증체계.방법:분별채용개량적CTAB법、개량적CTAB법연합DNA제취시제합법급DNA제취시제합법제취침향총DNA,이용통용인물ITS2P1/ITS2 P2확증rDNA ITS2목적편단,통과정교시험우선침향적PCR확증조건병대목적편단진행측서.결과:개량적CTAB법연합DNA제취시제합법제취총DNA적A260nm/A280nm1.79,질량농도350 mg·L-1,PCR확증목적편단산솔최고.불동인소수평대침향ITS2-PCR반응적영향순서위모판DNA＞인물＞Taq DNA취합매＞dNTP.최가반응체계위20 μL체계,DNA모판40 ng,인물0.2 mmol·L-,dNTP 0.5 mmol·L-,TaqDNA취합매1.5U.측서획득적목전편단장도230 bp,여GenBank중서향과침향속백목향서렬상사성100％.결론:CTAB법연합DNA시제합법가간단、쾌속획득고질량침향총DNA,정교시험가쾌속획득ITS2목적편단,위침향적분자감정화계통발육분석제공삼고.
