中国急救复苏与灾害医学杂志
中國急救複囌與災害醫學雜誌
중국급구복소여재해의학잡지
CHINA JOURNAL OF EMERGENCY RESUSCITATION AND DISASTER MEDICINE
2014年
12期
1086-1090
,共5页
姚旭东%张庆红%郝济伟%董宁%祝筱梅%姚咏明
姚旭東%張慶紅%郝濟偉%董寧%祝篠梅%姚詠明
요욱동%장경홍%학제위%동저%축소매%요영명
胰高血糖素样肽-1%单核细胞%免疫调控%信号转导%G蛋白偶联受体%烧伤
胰高血糖素樣肽-1%單覈細胞%免疫調控%信號轉導%G蛋白偶聯受體%燒傷
이고혈당소양태-1%단핵세포%면역조공%신호전도%G단백우련수체%소상
Glucagon-like peptide 1%Monocyte%Immune regulation%Signal transduction%G protein coupled receptor%Scalding
目的 阐明肠促胰岛素长效类似物Exendin-4(Ex-4)对烧伤小鼠脾脏单核细胞免疫调节功能的影响,并探讨其可能信号转导机制.方法 BALB/C小鼠随机(随机数字法)分为烫伤组(n=30)和假伤组(n=10),其中烫伤组动物背部按照15％总体表面积(TBSA)浸于94℃热水中8s造成烫伤,而假伤组动物背部皮肤则浸于37℃水中8s.伤后24 h取假伤组和烫伤组脾脏分离单核细胞进行培养,分别分为空白组(LPS-0)、脂多糖(LPS)组、LPS加低Ex-4组、LPS加中Ex-4组、LPS加高Ex-4组,均培养24h.用酶标仪检测吸光度值测定细胞活性.用ELISA法检测培养上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)水平.采用Western印迹法检测单核细胞胰高血糖素样肽1受体(GLP-1 R)、GPCR调节激酶2(GRK-2)、刺激性G蛋白亚基α(Gαs)和抑制性G蛋白亚基α(Gαi)的表达.使用cAMP和PKA活性试剂盒检测细胞内cAMP和cAMP依赖蛋白激酶(PKA)活性.结果 LPS加中、高剂量Ex-4假伤组单核细胞活性显著低于假伤LPS组(均P＜0.05),而烫伤组细胞增殖活性变化不明显.Ex-4作用后,烫伤组单核细胞分泌TNF-α增加(P＜0.05),而假伤组没有显著改变.两组内单核细胞IL-6的分泌均呈现剂量依赖性增加,但两组之间差异无统计学意义.两组IL-10的分泌均呈剂量依赖性增加,假伤组中浓度Ex-4促进效应已很明显,但烫伤组仅高浓度Ex-4具有促进作用,Ex-4对两组TGF-β分泌均起显著抑制作用,在假伤组呈显著的剂量依赖性(P＜0.05),但是在烫伤组不同浓度Ex-4的抑制效应差异无统计学意义.烫伤后脾脏单核细胞Ex-4信号转导通路分子包括GLP-1R、GRK-2和Gαs含量均下降(均P ＜0.05),而Gαi含量升高(P＜0.05).高剂量Ex-4对烫伤组单核细胞cAMP的促进作用显著低于假伤组(P＜0.05),但是烫伤组PKA水平高于假伤组(P＜0.05).结论 严重烫伤后Ex-4信号转导通路发生显著改变,导致Ex-4对单核细胞功能的调控发生部分抵抗甚至异常,Ex-4对烧伤小鼠单核细胞抗炎与抑炎反应均具有明显调节作用.
目的 闡明腸促胰島素長效類似物Exendin-4(Ex-4)對燒傷小鼠脾髒單覈細胞免疫調節功能的影響,併探討其可能信號轉導機製.方法 BALB/C小鼠隨機(隨機數字法)分為燙傷組(n=30)和假傷組(n=10),其中燙傷組動物揹部按照15％總體錶麵積(TBSA)浸于94℃熱水中8s造成燙傷,而假傷組動物揹部皮膚則浸于37℃水中8s.傷後24 h取假傷組和燙傷組脾髒分離單覈細胞進行培養,分彆分為空白組(LPS-0)、脂多糖(LPS)組、LPS加低Ex-4組、LPS加中Ex-4組、LPS加高Ex-4組,均培養24h.用酶標儀檢測吸光度值測定細胞活性.用ELISA法檢測培養上清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、IL-10、轉化生長因子-β(TGF-β)水平.採用Western印跡法檢測單覈細胞胰高血糖素樣肽1受體(GLP-1 R)、GPCR調節激酶2(GRK-2)、刺激性G蛋白亞基α(Gαs)和抑製性G蛋白亞基α(Gαi)的錶達.使用cAMP和PKA活性試劑盒檢測細胞內cAMP和cAMP依賴蛋白激酶(PKA)活性.結果 LPS加中、高劑量Ex-4假傷組單覈細胞活性顯著低于假傷LPS組(均P＜0.05),而燙傷組細胞增殖活性變化不明顯.Ex-4作用後,燙傷組單覈細胞分泌TNF-α增加(P＜0.05),而假傷組沒有顯著改變.兩組內單覈細胞IL-6的分泌均呈現劑量依賴性增加,但兩組之間差異無統計學意義.兩組IL-10的分泌均呈劑量依賴性增加,假傷組中濃度Ex-4促進效應已很明顯,但燙傷組僅高濃度Ex-4具有促進作用,Ex-4對兩組TGF-β分泌均起顯著抑製作用,在假傷組呈顯著的劑量依賴性(P＜0.05),但是在燙傷組不同濃度Ex-4的抑製效應差異無統計學意義.燙傷後脾髒單覈細胞Ex-4信號轉導通路分子包括GLP-1R、GRK-2和Gαs含量均下降(均P ＜0.05),而Gαi含量升高(P＜0.05).高劑量Ex-4對燙傷組單覈細胞cAMP的促進作用顯著低于假傷組(P＜0.05),但是燙傷組PKA水平高于假傷組(P＜0.05).結論 嚴重燙傷後Ex-4信號轉導通路髮生顯著改變,導緻Ex-4對單覈細胞功能的調控髮生部分牴抗甚至異常,Ex-4對燒傷小鼠單覈細胞抗炎與抑炎反應均具有明顯調節作用.
목적 천명장촉이도소장효유사물Exendin-4(Ex-4)대소상소서비장단핵세포면역조절공능적영향,병탐토기가능신호전도궤제.방법 BALB/C소서수궤(수궤수자법)분위탕상조(n=30)화가상조(n=10),기중탕상조동물배부안조15％총체표면적(TBSA)침우94℃열수중8s조성탕상,이가상조동물배부피부칙침우37℃수중8s.상후24 h취가상조화탕상조비장분리단핵세포진행배양,분별분위공백조(LPS-0)、지다당(LPS)조、LPS가저Ex-4조、LPS가중Ex-4조、LPS가고Ex-4조,균배양24h.용매표의검측흡광도치측정세포활성.용ELISA법검측배양상청종류배사인자-α(TNF-α)、백세포개소-6(IL-6)、IL-10、전화생장인자-β(TGF-β)수평.채용Western인적법검측단핵세포이고혈당소양태1수체(GLP-1 R)、GPCR조절격매2(GRK-2)、자격성G단백아기α(Gαs)화억제성G단백아기α(Gαi)적표체.사용cAMP화PKA활성시제합검측세포내cAMP화cAMP의뢰단백격매(PKA)활성.결과 LPS가중、고제량Ex-4가상조단핵세포활성현저저우가상LPS조(균P＜0.05),이탕상조세포증식활성변화불명현.Ex-4작용후,탕상조단핵세포분비TNF-α증가(P＜0.05),이가상조몰유현저개변.량조내단핵세포IL-6적분비균정현제량의뢰성증가,단량조지간차이무통계학의의.량조IL-10적분비균정제량의뢰성증가,가상조중농도Ex-4촉진효응이흔명현,단탕상조부고농도Ex-4구유촉진작용,Ex-4대량조TGF-β분비균기현저억제작용,재가상조정현저적제량의뢰성(P＜0.05),단시재탕상조불동농도Ex-4적억제효응차이무통계학의의.탕상후비장단핵세포Ex-4신호전도통로분자포괄GLP-1R、GRK-2화Gαs함량균하강(균P ＜0.05),이Gαi함량승고(P＜0.05).고제량Ex-4대탕상조단핵세포cAMP적촉진작용현저저우가상조(P＜0.05),단시탕상조PKA수평고우가상조(P＜0.05).결론 엄중탕상후Ex-4신호전도통로발생현저개변,도치Ex-4대단핵세포공능적조공발생부분저항심지이상,Ex-4대소상소서단핵세포항염여억염반응균구유명현조절작용.
