癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2015年
1期
11-15,20
,共6页
李妙%马璐%柏青%陈雯%陈丽萍
李妙%馬璐%柏青%陳雯%陳麗萍
리묘%마로%백청%진문%진려평
氯化镉%细胞毒性%蛋白磷酸酶2A%p-JNK%金属硫蛋白
氯化鎘%細胞毒性%蛋白燐痠酶2A%p-JNK%金屬硫蛋白
록화력%세포독성%단백린산매2A%p-JNK%금속류단백
CdCl2%cytotoxicity%protein phosphatase 2A%p-JNK%metallothionein
目的：探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)B56亚基在调控CdCl2诱导的细胞毒性中的作用及其机制。方法：利用病毒感染法在人胚肾上皮细胞HEK上构建PP2A B56α表达降低的细胞株模型(HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2)，采用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CdCl2诱导的细胞毒性。用不同浓度(0、10、20、40和80μ mol/L)CdCl2联合或不联合c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125染毒细胞不同时间(0、2、6、12和24 h)，采用免疫印迹检测B56α亚基、金属硫蛋白(MT)的表达和JNK的磷酸化水平。结果：免疫印迹结果证实细胞株HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2构建成功。与对照组比较，PP2A B 56α表达抑制导致镉诱导的细胞毒性减小，JNK的磷酸化水平和MT的表达水平均显著增加。用不同剂量CdCl2处理细胞株12 h ，发现B56α表达抑制导致JNK磷酸化(p-JNK)分别增加了2.78和1.26倍(P<0.05)，MT的表达也分别增加了1.36和1.19倍(<0.05)。用p-JNK抑制剂SP600125作用时， p-JNK的表达降低了35%~38%(P<0.05)，MT的表达下降了13%~35%(P<0.05)，CdCl2诱导的细胞毒性显著增加(P<0.05)。此外，用CdCl2处理细胞不同时间点，B56α的表达逐渐降低(P<0.05)，而p-JNK和MT的表达水平呈逐渐增加趋势(P<0.05)。结论：PP2A B 56α在调控CdCl2诱导的细胞毒性中起着重要作用，其作用机制可能通过介导JNK的去磷酸化调控MT的表达而发挥作用。本研究揭示了PP2A参与重金属应激的关键靶点和信号通路的调控。
目的：探討蛋白燐痠酶2A(PP2A)B56亞基在調控CdCl2誘導的細胞毒性中的作用及其機製。方法：利用病毒感染法在人胚腎上皮細胞HEK上構建PP2A B56α錶達降低的細胞株模型(HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2)，採用改良四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測CdCl2誘導的細胞毒性。用不同濃度(0、10、20、40和80μ mol/L)CdCl2聯閤或不聯閤c-Jun氨基末耑激酶(JNK)抑製劑SP600125染毒細胞不同時間(0、2、6、12和24 h)，採用免疫印跡檢測B56α亞基、金屬硫蛋白(MT)的錶達和JNK的燐痠化水平。結果：免疫印跡結果證實細胞株HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2構建成功。與對照組比較，PP2A B 56α錶達抑製導緻鎘誘導的細胞毒性減小，JNK的燐痠化水平和MT的錶達水平均顯著增加。用不同劑量CdCl2處理細胞株12 h ，髮現B56α錶達抑製導緻JNK燐痠化(p-JNK)分彆增加瞭2.78和1.26倍(P<0.05)，MT的錶達也分彆增加瞭1.36和1.19倍(<0.05)。用p-JNK抑製劑SP600125作用時， p-JNK的錶達降低瞭35%~38%(P<0.05)，MT的錶達下降瞭13%~35%(P<0.05)，CdCl2誘導的細胞毒性顯著增加(P<0.05)。此外，用CdCl2處理細胞不同時間點，B56α的錶達逐漸降低(P<0.05)，而p-JNK和MT的錶達水平呈逐漸增加趨勢(P<0.05)。結論：PP2A B 56α在調控CdCl2誘導的細胞毒性中起著重要作用，其作用機製可能通過介導JNK的去燐痠化調控MT的錶達而髮揮作用。本研究揭示瞭PP2A參與重金屬應激的關鍵靶點和信號通路的調控。
목적：탐토단백린산매2A(PP2A)B56아기재조공CdCl2유도적세포독성중적작용급기궤제。방법：이용병독감염법재인배신상피세포HEK상구건PP2A B56α표체강저적세포주모형(HEK-SHB56α-1화HEK-SHB56α-2)，채용개량사갑기우담서염(MTT)법검측CdCl2유도적세포독성。용불동농도(0、10、20、40화80μ mol/L)CdCl2연합혹불연합c-Jun안기말단격매(JNK)억제제SP600125염독세포불동시간(0、2、6、12화24 h)，채용면역인적검측B56α아기、금속류단백(MT)적표체화JNK적린산화수평。결과：면역인적결과증실세포주HEK-SHB56α-1화HEK-SHB56α-2구건성공。여대조조비교，PP2A B 56α표체억제도치력유도적세포독성감소，JNK적린산화수평화MT적표체수평균현저증가。용불동제량CdCl2처리세포주12 h ，발현B56α표체억제도치JNK린산화(p-JNK)분별증가료2.78화1.26배(P<0.05)，MT적표체야분별증가료1.36화1.19배(<0.05)。용p-JNK억제제SP600125작용시， p-JNK적표체강저료35%~38%(P<0.05)，MT적표체하강료13%~35%(P<0.05)，CdCl2유도적세포독성현저증가(P<0.05)。차외，용CdCl2처리세포불동시간점，B56α적표체축점강저(P<0.05)，이p-JNK화MT적표체수평정축점증가추세(P<0.05)。결론：PP2A B 56α재조공CdCl2유도적세포독성중기착중요작용，기작용궤제가능통과개도JNK적거린산화조공MT적표체이발휘작용。본연구게시료PP2A삼여중금속응격적관건파점화신호통로적조공。
OBJECTIVE:To identify involvement ofprotein phosphatase 2A B56αin the regulation of cytotoxicity induced by cadmium chloride (CdCl2) and address the underlying molecular mechanism.METHODS:Stable cell lines were generated by infecting HEK cells with lentiviral shRNA targeting B56α subunit. Modified MTT was performed to detect the cytotoxicity induced by CdCl2. Immunoblotting analysis was applied to examine the expressions of B56α,p-JNK and MT in cells treated with differentconcentrations ofCdCl2or co-treated with SP600125.RESULTS:Immunoblotting results verified that stable cell lines HEK-SHB56α-1 and HEK-SHB56α-2 were successfully established. We found that suppression of PP2A B56α reduced the cytotoxicity induced by CdCl2. In addition,the phosphorylation status of c-Jun N-terminal kinases (JNK)and the expression level of MT weresignificantly increased in response to CdCl2. Suppression of B56α led to a 2.78 or 1.26-fold(P<0.05) increase of p-JNK in cells treated with CdCl2 for 12 h,and a 1.36 or 1.19-fold (P<0.05) increase of MT. Upon SP600125 treatment,the expression level of p-JNK and MT werereduced by 35%-38% (P<0.05) and 13%-35%(P<0.05),respectively,whilecytotoxicity induced by CdCl2 was enhanced(P<0.05). More-over,the expression of B56α was lowered(P<0.05),but p-JNK and MT were increased(P<0.05) inatime-dependent manner upon CdCl2 treatment. CONCLUSION:PP2A B56α regulated MT expression via dephosphorylating JNK,and affecting the cytotoxicity induced by CdCl2. Our study demonstratedthat PP2A B56α participated in regulating the targets and pathways in response to metallic stress.
