工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2014年
6期
39-44
,共6页
嗜热脂肪地芽孢杆菌%NAD激酶%克隆表达%酶学性质
嗜熱脂肪地芽孢桿菌%NAD激酶%剋隆錶達%酶學性質
기열지방지아포간균%NAD격매%극륭표체%매학성질
Geobacillus%stearothermophilus%NAD%kinase%cloning%and%expression%enzymatic%characterization
NAD激酶能催化NAD生成NADP.本研究采用PCR技术从嗜热脂肪地芽孢杆菌基因组中获得NAD激酶基因,以pET30a(+)为表达载体、E.coli BL21(DE3)为宿主菌,实现其在大肠杆菌中异源表达,并进行酶学性质研究.结果显示,嗜热脂肪地芽孢杆菌中NAD激酶编码基因大小为816 bp,酶分子量大约为35 kD.酶学性质分析表明,来源于嗜热脂肪地芽孢杆菌的NAD激酶最适反应温度和pH分别为35℃、pH 7.5,在35℃中保温2h后仍能保持80％左右的活性.Mn2+、Ca2+对该酶有较强的激活作用,在最适反应条件下该酶的比活力为4.43 U/mg.动力学性质分析结果显示NAD激酶对底物NAD催化的Km和Vmax分别为1.46 mmol/L和0.25 μmol/(L·min).NAD激酶在大肠杆菌的异源表达为以NAD为底物生物合成NADP提供了更多生物资源.
NAD激酶能催化NAD生成NADP.本研究採用PCR技術從嗜熱脂肪地芽孢桿菌基因組中穫得NAD激酶基因,以pET30a(+)為錶達載體、E.coli BL21(DE3)為宿主菌,實現其在大腸桿菌中異源錶達,併進行酶學性質研究.結果顯示,嗜熱脂肪地芽孢桿菌中NAD激酶編碼基因大小為816 bp,酶分子量大約為35 kD.酶學性質分析錶明,來源于嗜熱脂肪地芽孢桿菌的NAD激酶最適反應溫度和pH分彆為35℃、pH 7.5,在35℃中保溫2h後仍能保持80％左右的活性.Mn2+、Ca2+對該酶有較彊的激活作用,在最適反應條件下該酶的比活力為4.43 U/mg.動力學性質分析結果顯示NAD激酶對底物NAD催化的Km和Vmax分彆為1.46 mmol/L和0.25 μmol/(L·min).NAD激酶在大腸桿菌的異源錶達為以NAD為底物生物閤成NADP提供瞭更多生物資源.
NAD격매능최화NAD생성NADP.본연구채용PCR기술종기열지방지아포간균기인조중획득NAD격매기인,이pET30a(+)위표체재체、E.coli BL21(DE3)위숙주균,실현기재대장간균중이원표체,병진행매학성질연구.결과현시,기열지방지아포간균중NAD격매편마기인대소위816 bp,매분자량대약위35 kD.매학성질분석표명,래원우기열지방지아포간균적NAD격매최괄반응온도화pH분별위35℃、pH 7.5,재35℃중보온2h후잉능보지80％좌우적활성.Mn2+、Ca2+대해매유교강적격활작용,재최괄반응조건하해매적비활력위4.43 U/mg.동역학성질분석결과현시NAD격매대저물NAD최화적Km화Vmax분별위1.46 mmol/L화0.25 μmol/(L·min).NAD격매재대장간균적이원표체위이NAD위저물생물합성NADP제공료경다생물자원.
