宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2014年
12期
1341-1345
,共5页
NAA10%单克隆抗体%制备%鉴定
NAA10%單剋隆抗體%製備%鑒定
NAA10%단극륭항체%제비%감정
NAA10%monoclonal antibody preparetion%identification
目的 制备乙酰基转移酶NAA10单克隆抗体并进行初步鉴定.方法 利用PCR扩增技术由结肠癌细胞株HT-29中克隆出NAA10全长cDNA.将上述cDNA与原核表达载体pGEX-4T1重组,并将重组体转化大肠杆菌BL-21(DE3),随后行融合蛋白GST-NAA10的表诱导达,用Glutathione Sepharose 4B进行纯化.用纯化的GST-NAA10融合蛋白背部皮下多点注射免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗Naa10的单克隆抗体;随后利用ELISA鉴定其效价,Western blotting鉴定特异性.结果 本研究获得只与NAA10特异反应的单抗3株(C7、3A9和5E3),初步确定C7为IgM型,5E3为IgG2a型,3A9为IgM型;单抗C7、5E3针对NAA10具有较高特异性,而3A9特异性相对较差.结论 稳定表达的NAA10单克隆抗体细胞株建立成功.
目的 製備乙酰基轉移酶NAA10單剋隆抗體併進行初步鑒定.方法 利用PCR擴增技術由結腸癌細胞株HT-29中剋隆齣NAA10全長cDNA.將上述cDNA與原覈錶達載體pGEX-4T1重組,併將重組體轉化大腸桿菌BL-21(DE3),隨後行融閤蛋白GST-NAA10的錶誘導達,用Glutathione Sepharose 4B進行純化.用純化的GST-NAA10融閤蛋白揹部皮下多點註射免疫Balb/c小鼠,通過雜交瘤技術製備抗Naa10的單剋隆抗體;隨後利用ELISA鑒定其效價,Western blotting鑒定特異性.結果 本研究穫得隻與NAA10特異反應的單抗3株(C7、3A9和5E3),初步確定C7為IgM型,5E3為IgG2a型,3A9為IgM型;單抗C7、5E3針對NAA10具有較高特異性,而3A9特異性相對較差.結論 穩定錶達的NAA10單剋隆抗體細胞株建立成功.
목적 제비을선기전이매NAA10단극륭항체병진행초보감정.방법 이용PCR확증기술유결장암세포주HT-29중극륭출NAA10전장cDNA.장상술cDNA여원핵표체재체pGEX-4T1중조,병장중조체전화대장간균BL-21(DE3),수후행융합단백GST-NAA10적표유도체,용Glutathione Sepharose 4B진행순화.용순화적GST-NAA10융합단백배부피하다점주사면역Balb/c소서,통과잡교류기술제비항Naa10적단극륭항체;수후이용ELISA감정기효개,Western blotting감정특이성.결과 본연구획득지여NAA10특이반응적단항3주(C7、3A9화5E3),초보학정C7위IgM형,5E3위IgG2a형,3A9위IgM형;단항C7、5E3침대NAA10구유교고특이성,이3A9특이성상대교차.결론 은정표체적NAA10단극륭항체세포주건립성공.
