农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2015年
2期
213-219
,共7页
陈西锐%李建%李科瑛%许晓磊%雷安民
陳西銳%李建%李科瑛%許曉磊%雷安民
진서예%리건%리과영%허효뢰%뢰안민
小鼠卵母细胞%线粒体融合蛋白2基因(Mfn2)%体外转录%显微注射
小鼠卵母細胞%線粒體融閤蛋白2基因(Mfn2)%體外轉錄%顯微註射
소서란모세포%선립체융합단백2기인(Mfn2)%체외전록%현미주사
Mouse oocyte%Mitofusin 2 gene(Mfn2)%Transcription in vitro%Microinjection
线粒体融合蛋白2基因(mitofusin2,Mfn2)参与细胞凋亡和细胞周期调控,在卵母细胞和胎盘发育中起着重要作用.本研究旨在探讨Mfn2基因对小鼠(Mus musculus)卵母细胞体外成熟过程的影响.从小鼠卵巢中克隆Mfn2基因并构建pMfn2-Venus真核表达载体.经脂质体2000介导重组质粒pMfn2-Venus转染293T细胞(病毒包装细胞),确认重组质粒在293T细胞内的表达及定位.将pMfn2-Venus体外转录为cRNA,并注射入小鼠卵细胞中,进行体外成熟培养,并统计卵母细胞生发泡破裂(germinalvesiclebreakdown,GVBD)发生率以及第一极体(first polarbody,PB1)排出率,荧光显微镜下观察其表达及定位.结果显示,注射了Mfn2-Venus cRNA的卵母细胞,其GVBD发生率以及PB1排出率与对照组相比显著降低(P＜0.0001,P＜0.05).本研究首次揭示了Mfn2基因对小鼠卵母细胞体外成熟过程的影响,为卵母细胞体外成熟的研究提供了一个新方向,同时也为研究减数分裂过程中Mfn2基因提供了一个平台.
線粒體融閤蛋白2基因(mitofusin2,Mfn2)參與細胞凋亡和細胞週期調控,在卵母細胞和胎盤髮育中起著重要作用.本研究旨在探討Mfn2基因對小鼠(Mus musculus)卵母細胞體外成熟過程的影響.從小鼠卵巢中剋隆Mfn2基因併構建pMfn2-Venus真覈錶達載體.經脂質體2000介導重組質粒pMfn2-Venus轉染293T細胞(病毒包裝細胞),確認重組質粒在293T細胞內的錶達及定位.將pMfn2-Venus體外轉錄為cRNA,併註射入小鼠卵細胞中,進行體外成熟培養,併統計卵母細胞生髮泡破裂(germinalvesiclebreakdown,GVBD)髮生率以及第一極體(first polarbody,PB1)排齣率,熒光顯微鏡下觀察其錶達及定位.結果顯示,註射瞭Mfn2-Venus cRNA的卵母細胞,其GVBD髮生率以及PB1排齣率與對照組相比顯著降低(P＜0.0001,P＜0.05).本研究首次揭示瞭Mfn2基因對小鼠卵母細胞體外成熟過程的影響,為卵母細胞體外成熟的研究提供瞭一箇新方嚮,同時也為研究減數分裂過程中Mfn2基因提供瞭一箇平檯.
선립체융합단백2기인(mitofusin2,Mfn2)삼여세포조망화세포주기조공,재란모세포화태반발육중기착중요작용.본연구지재탐토Mfn2기인대소서(Mus musculus)란모세포체외성숙과정적영향.종소서란소중극륭Mfn2기인병구건pMfn2-Venus진핵표체재체.경지질체2000개도중조질립pMfn2-Venus전염293T세포(병독포장세포),학인중조질립재293T세포내적표체급정위.장pMfn2-Venus체외전록위cRNA,병주사입소서란세포중,진행체외성숙배양,병통계란모세포생발포파렬(germinalvesiclebreakdown,GVBD)발생솔이급제일겁체(first polarbody,PB1)배출솔,형광현미경하관찰기표체급정위.결과현시,주사료Mfn2-Venus cRNA적란모세포,기GVBD발생솔이급PB1배출솔여대조조상비현저강저(P＜0.0001,P＜0.05).본연구수차게시료Mfn2기인대소서란모세포체외성숙과정적영향,위란모세포체외성숙적연구제공료일개신방향,동시야위연구감수분렬과정중Mfn2기인제공료일개평태.
