棉花学报
棉花學報
면화학보
COTTON SCIENCE
2014年
6期
563-568
,共6页
巩元勇%倪万潮%帕尔哈提·买买提%郭书巧%束红梅%何林池
鞏元勇%倪萬潮%帕爾哈提·買買提%郭書巧%束紅梅%何林池
공원용%예만조%파이합제·매매제%곽서교%속홍매%하림지
棉花%GhEPSPS基因%原核表达%SDS-PAGE
棉花%GhEPSPS基因%原覈錶達%SDS-PAGE
면화%GhEPSPS기인%원핵표체%SDS-PAGE
cotton%GhEPSPS gene%prokaryotic expression%SDS-PAGE
目的在于构建棉花GhEPSPS基因的原核表达载体,并在宿主大肠杆菌中成功诱导表达.利用RT-PCR技术从陆地棉苏棉18中克隆获得GhEPSPS基因的开放阅读框序列,连接到pEASY-Blunt平端载体,构建获得重组载体pEASY-Blunt-GhEPSPS;以该重组载体为模板,PCR获得两端含有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的GhEPSPS基因CDS序列,通过这2个酶切位点插入到pET32a载体,构建获得原核表达重组载体pET32a-GhEPSPS,转化到宿主菌株BL21 (DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测目的基因的表达情况.研究结果表明,成功克隆获得了棉花GhEPSPS基因的CDS序列,并成功构建了该基因的原核表达载体,目的基因能够在宿主菌中被诱导大量表达.该研究结果将为深入研究棉花EPSPS酶的结构、功能以及酶学特性提供重要的研究基础.
目的在于構建棉花GhEPSPS基因的原覈錶達載體,併在宿主大腸桿菌中成功誘導錶達.利用RT-PCR技術從陸地棉囌棉18中剋隆穫得GhEPSPS基因的開放閱讀框序列,連接到pEASY-Blunt平耑載體,構建穫得重組載體pEASY-Blunt-GhEPSPS;以該重組載體為模闆,PCR穫得兩耑含有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位點的GhEPSPS基因CDS序列,通過這2箇酶切位點插入到pET32a載體,構建穫得原覈錶達重組載體pET32a-GhEPSPS,轉化到宿主菌株BL21 (DE3)中,經IPTG誘導後,SDS-PAGE檢測目的基因的錶達情況.研究結果錶明,成功剋隆穫得瞭棉花GhEPSPS基因的CDS序列,併成功構建瞭該基因的原覈錶達載體,目的基因能夠在宿主菌中被誘導大量錶達.該研究結果將為深入研究棉花EPSPS酶的結構、功能以及酶學特性提供重要的研究基礎.
목적재우구건면화GhEPSPS기인적원핵표체재체,병재숙주대장간균중성공유도표체.이용RT-PCR기술종륙지면소면18중극륭획득GhEPSPS기인적개방열독광서렬,련접도pEASY-Blunt평단재체,구건획득중조재체pEASY-Blunt-GhEPSPS;이해중조재체위모판,PCR획득량단함유EcoRⅠ화XhoⅠ매절위점적GhEPSPS기인CDS서렬,통과저2개매절위점삽입도pET32a재체,구건획득원핵표체중조재체pET32a-GhEPSPS,전화도숙주균주BL21 (DE3)중,경IPTG유도후,SDS-PAGE검측목적기인적표체정황.연구결과표명,성공극륭획득료면화GhEPSPS기인적CDS서렬,병성공구건료해기인적원핵표체재체,목적기인능구재숙주균중피유도대량표체.해연구결과장위심입연구면화EPSPS매적결구、공능이급매학특성제공중요적연구기출.
