CAJ | 학술논문

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用.方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系.应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21表达和SPRY2蛋白表达水平.四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力.结果:实时定量PCR及Western blot检测结果表明:转染U266细胞后,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量较U266/un组差异明显下降(P＜0.05);转染miR-21 mimics组的U266细胞SPRY2的蛋白表达量较无转染组(untreated)和阴性对照组(siRNA)明显降低,差异均具有统计学意义(P＜0.01).与无转染组、阴性对照组相比:MTT法显示转染组48、72、96h细胞的生长速度明显减慢,增殖率明显下降(P＜0.01);流式细胞术表明miR-21 mimics转染U266细胞48、72h后,细胞凋亡率分别为U266组[(24.7±1.97)％、(38.6±1.56)％]、siRNA组[(27.3±1.72)％、(37.3±1.59)％]和U266/miR-21组[(12.7±1.27)％、(22.1±1.63)％],与两对照组比较,U266/miR-21组细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).划痕实验显示转染组24、48h细胞迁移的能力明显减弱(P＜ 0.05);Transwell实验证实转染组48、72h细胞穿过聚磷酸酯膜的U266细胞数明显减少,细胞穿膜能力明显降低(P＜0.05).结论:MiR-21下调SPRY2基因表达能够在体外条件下促进MM细胞的增殖和侵袭作用,揭示其在MM的发生、发展及转移过程中的作用及可能的机制,为确立新分子靶向治疗提供可靠的研究依据.
목적:탐토miR-21하조SPRY2기인표체재다발성골수류(multiple myeloma,MM)발생발전이급전이과정중적작용.방법:구건miR-21표체재체LV-anti-miR-21급지질체전염법사선은정침묵SPRY2적MM세포계.응용실시정량PCR화Western blot검측miR-21표체화SPRY2단백표체수평.사갑기우담서람법(MTT법)검측세포증식능력;류식세포의분석세포주기;화흔실험검측세포천이능력;Transwell실험검측세포침습능력.결과:실시정량PCR급Western blot검측결과표명:전염U266세포후,U266/LV-anti-miR-21만병독MOI 20조화MOI 40조miR-21표체량교U266/un조차이명현하강(P＜0.05);전염miR-21 mimics조적U266세포SPRY2적단백표체량교무전염조(untreated)화음성대조조(siRNA)명현강저,차이균구유통계학의의(P＜0.01).여무전염조、음성대조조상비:MTT법현시전염조48、72、96h세포적생장속도명현감만,증식솔명현하강(P＜0.01);류식세포술표명miR-21 mimics전염U266세포48、72h후,세포조망솔분별위U266조[(24.7±1.97)％、(38.6±1.56)％]、siRNA조[(27.3±1.72)％、(37.3±1.59)％]화U266/miR-21조[(12.7±1.27)％、(22.1±1.63)％],여량대조조비교,U266/miR-21조세포조망솔명현강저,G0/G1기세포명현감소,차이유통계학의의(P＜0.05).화흔실험현시전염조24、48h세포천이적능력명현감약(P＜ 0.05);Transwell실험증실전염조48、72h세포천과취린산지막적U266세포수명현감소,세포천막능력명현강저(P＜0.05).결론:MiR-21하조SPRY2기인표체능구재체외조건하촉진MM세포적증식화침습작용,게시기재MM적발생、발전급전이과정중적작용급가능적궤제,위학립신분자파향치료제공가고적연구의거.