西南农业学报
西南農業學報
서남농업학보
SOUTHWEST CHINA JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
6期
2574-2579
,共6页
吴春妍%杨冠松%张爱丽%申仕康%王跃华
吳春妍%楊冠鬆%張愛麗%申仕康%王躍華
오춘연%양관송%장애려%신사강%왕약화
甜菜树%ISSR-PCR%正交设计%单因素试验%优化
甜菜樹%ISSR-PCR%正交設計%單因素試驗%優化
첨채수%ISSR-PCR%정교설계%단인소시험%우화
Yunnanopilia%longistaminea%ISSR-PCR%Orthogonal%design%Single%factor%test%Optimization
采用正交和单因素试验设计方法,对影响甜菜树ISSR-PCR反应体系的dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA及退火温度5个因素进行优化试验,建立了稳定的、可重复的甜菜树ISSR-PCR扩增反应体系.在20μl的反应体系中,dNTPs浓度为0.4mmol/L,TaqDNA聚合酶用量为1.0U,引物浓度为0.2 μmol/L,模板DNA浓度为45ng.扩增程序:94℃预变性5min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2min,40个循环,最后72℃延伸8 min.这一优化体系的建立为深入展开甜菜树种质资源的遗传多样性研究奠定基础.
採用正交和單因素試驗設計方法,對影響甜菜樹ISSR-PCR反應體繫的dNTPs、TaqDNA聚閤酶、引物、模闆DNA及退火溫度5箇因素進行優化試驗,建立瞭穩定的、可重複的甜菜樹ISSR-PCR擴增反應體繫.在20μl的反應體繫中,dNTPs濃度為0.4mmol/L,TaqDNA聚閤酶用量為1.0U,引物濃度為0.2 μmol/L,模闆DNA濃度為45ng.擴增程序:94℃預變性5min;94℃變性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2min,40箇循環,最後72℃延伸8 min.這一優化體繫的建立為深入展開甜菜樹種質資源的遺傳多樣性研究奠定基礎.
채용정교화단인소시험설계방법,대영향첨채수ISSR-PCR반응체계적dNTPs、TaqDNA취합매、인물、모판DNA급퇴화온도5개인소진행우화시험,건립료은정적、가중복적첨채수ISSR-PCR확증반응체계.재20μl적반응체계중,dNTPs농도위0.4mmol/L,TaqDNA취합매용량위1.0U,인물농도위0.2 μmol/L,모판DNA농도위45ng.확증정서:94℃예변성5min;94℃변성1 min,52℃퇴화1 min,72℃연신2min,40개순배,최후72℃연신8 min.저일우화체계적건립위심입전개첨채수충질자원적유전다양성연구전정기출.
