畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2015年
1期
33-37
,共5页
张艳%刘海隆%曹宗喜%林哲敏%谭树义
張豔%劉海隆%曹宗喜%林哲敏%譚樹義
장염%류해륭%조종희%림철민%담수의
柔嫩艾美耳球虫%海南株%3-1E基因%原核表达
柔嫩艾美耳毬蟲%海南株%3-1E基因%原覈錶達
유눈애미이구충%해남주%3-1E기인%원핵표체
Eimeria tenella%HN Strain%3-1E gene%prokaryotic expression
根据已报道的柔嫩艾美耳球虫3-1E基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到1条特异片段,将扩增产物克隆至pMD-18T载体,转化感受态菌JM109,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序.测序结果与已发表的国内外相关虫株的3-1E基因序列比较,核苷酸的同源性均在99.2％～ 99.8％,氨基酸的同源性均在98.2％ ～ 100％.然后将重组质粒和表达载体pGEX-4T-1分别用XhoⅠ和EcoR Ⅰ酶切后构建重组表达载体pGEX-3-1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白的分子量为44.7 ku,诱导表达5h的蛋白表达量可达到30％以上.
根據已報道的柔嫩艾美耳毬蟲3-1E基因序列設計引物,以孢子化卵囊總RNA為模闆,用RT-PCR方法擴增得到1條特異片段,將擴增產物剋隆至pMD-18T載體,轉化感受態菌JM109,經酶切鑒定穫得暘性重組質粒併對其進行測序.測序結果與已髮錶的國內外相關蟲株的3-1E基因序列比較,覈苷痠的同源性均在99.2％～ 99.8％,氨基痠的同源性均在98.2％ ～ 100％.然後將重組質粒和錶達載體pGEX-4T-1分彆用XhoⅠ和EcoR Ⅰ酶切後構建重組錶達載體pGEX-3-1E,併將其轉化入大腸桿菌BL21中,提取質粒經酶切和PCR鑒定正確後,用IPTG誘導錶達.錶達產物經SDS-PAGE和Western blot檢測顯示,3-1E基因在大腸桿菌中成功錶達,融閤蛋白的分子量為44.7 ku,誘導錶達5h的蛋白錶達量可達到30％以上.
근거이보도적유눈애미이구충3-1E기인서렬설계인물,이포자화란낭총RNA위모판,용RT-PCR방법확증득도1조특이편단,장확증산물극륭지pMD-18T재체,전화감수태균JM109,경매절감정획득양성중조질립병대기진행측서.측서결과여이발표적국내외상관충주적3-1E기인서렬비교,핵감산적동원성균재99.2％～ 99.8％,안기산적동원성균재98.2％ ～ 100％.연후장중조질립화표체재체pGEX-4T-1분별용XhoⅠ화EcoR Ⅰ매절후구건중조표체재체pGEX-3-1E,병장기전화입대장간균BL21중,제취질립경매절화PCR감정정학후,용IPTG유도표체.표체산물경SDS-PAGE화Western blot검측현시,3-1E기인재대장간균중성공표체,융합단백적분자량위44.7 ku,유도표체5h적단백표체량가체도30％이상.
