四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2014年
6期
1285-1290
,共6页
冷鹂%涂丽%代易颖%郭婷%孙星汉%卿人韦%兰利琼
冷鸝%塗麗%代易穎%郭婷%孫星漢%卿人韋%蘭利瓊
랭리%도려%대역영%곽정%손성한%경인위%란리경
三角褐指藻%磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶%RNAi%油脂%生物能源
三角褐指藻%燐痠烯醇式丙酮痠羧化酶%RNAi%油脂%生物能源
삼각갈지조%린산희순식병동산최화매%RNAi%유지%생물능원
Phaeodactylum tricornutum%PEPC%RNAi%Lipid%Biological energy source
本文应用生物信息学和RT-PCR方法分别获得了三角褐指藻两个PEPC全长cDNA,分别称为:PtPEPC1和PtPEPC2,前者完整开放阅读框3030bp,编码1009个氨基酸,后者完整开放阅读框2634bp,编码877个氨基酸;基于克隆所得PtPEPC的ORF构建了反向互补RNA干扰载体pPha-PtPEPC1RNAi和pPha-PtPEPC2RNAi,并用轰击法(PDS-1000/He)转化野生型三角褐指藻,筛选鉴定到了所需的阳性转基因藻;实时定量RT-PCR结果揭示:含PtPEPC RNA干扰结构的转基因藻的PEPCase基因的表达水平比野生型三角褐指藻该酶的表达水平有显著降低;野生型藻和转基因藻的油脂含量定量分析结果揭示:含RNAi干扰结构的转基因三角褐指藻油脂含量也明显高于野生型三角褐指藻,油脂增幅达2％～12％.
本文應用生物信息學和RT-PCR方法分彆穫得瞭三角褐指藻兩箇PEPC全長cDNA,分彆稱為:PtPEPC1和PtPEPC2,前者完整開放閱讀框3030bp,編碼1009箇氨基痠,後者完整開放閱讀框2634bp,編碼877箇氨基痠;基于剋隆所得PtPEPC的ORF構建瞭反嚮互補RNA榦擾載體pPha-PtPEPC1RNAi和pPha-PtPEPC2RNAi,併用轟擊法(PDS-1000/He)轉化野生型三角褐指藻,篩選鑒定到瞭所需的暘性轉基因藻;實時定量RT-PCR結果揭示:含PtPEPC RNA榦擾結構的轉基因藻的PEPCase基因的錶達水平比野生型三角褐指藻該酶的錶達水平有顯著降低;野生型藻和轉基因藻的油脂含量定量分析結果揭示:含RNAi榦擾結構的轉基因三角褐指藻油脂含量也明顯高于野生型三角褐指藻,油脂增幅達2％～12％.
본문응용생물신식학화RT-PCR방법분별획득료삼각갈지조량개PEPC전장cDNA,분별칭위:PtPEPC1화PtPEPC2,전자완정개방열독광3030bp,편마1009개안기산,후자완정개방열독광2634bp,편마877개안기산;기우극륭소득PtPEPC적ORF구건료반향호보RNA간우재체pPha-PtPEPC1RNAi화pPha-PtPEPC2RNAi,병용굉격법(PDS-1000/He)전화야생형삼각갈지조,사선감정도료소수적양성전기인조;실시정량RT-PCR결과게시:함PtPEPC RNA간우결구적전기인조적PEPCase기인적표체수평비야생형삼각갈지조해매적표체수평유현저강저;야생형조화전기인조적유지함량정량분석결과게시:함RNAi간우결구적전기인삼각갈지조유지함량야명현고우야생형삼각갈지조,유지증폭체2％～12％.
