中国组织化学与细胞化学杂志
中國組織化學與細胞化學雜誌
중국조직화학여세포화학잡지
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISY AND CYTOCHEMISY
2014年
6期
491-496
,共6页
刘卓琦%杨晓红%肖影群%黄波%章萍%杨仙荷%黄昀%王炜东%王蒙蒙
劉卓琦%楊曉紅%肖影群%黃波%章萍%楊仙荷%黃昀%王煒東%王矇矇
류탁기%양효홍%초영군%황파%장평%양선하%황윤%왕위동%왕몽몽
microRNA%原位杂交技术%影响因素
microRNA%原位雜交技術%影響因素
microRNA%원위잡교기술%영향인소
microRNA%In situ hybridization%Influence factor
目的 探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法.方法 选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U6探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-231爬片细胞进行U6探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR-375的表达分析.结果 不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的U6表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20 μg/ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200 μg/ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2 μg/ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为1 ng/ml和100 ng/ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT 549的miR-375表达明显低于T47D.结论 miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助.
目的 探討miRNA原位雜交技術的多種影響因素,以完善miRNA原位雜交分析方法.方法 選擇不同組織來源、保存時間、切片厚度的常規病理組織切片進行U6探針的原位雜交分析;選擇不同濃度的蛋白酶K對組織切片與MDA-MB-231爬片細胞進行U6探針的原位雜交分析;實時定量RT-PCR方法和爬片細胞原位雜交對BT549、T47D細胞株進行miR-375的錶達分析.結果 不同組織來源、保存時間、切片厚度的石蠟標本均能顯示細胞覈內的U6錶達;組織切片原位雜交實驗中,乳腺組織切片20 μg/ml的蛋白酶K作用組較其他組的原位雜交效果好;肝髒組織切片200 μg/ml的蛋白酶K作用組的顯色最好;爬片細胞原位雜交實驗中,2 μg/ml的蛋白酶K作用組的顯色更深;U6與miR-375的原位雜交最適濃度分彆為1 ng/ml和100 ng/ml;實時定量RT-PCR和爬片細胞原位雜交結果均顯示,BT 549的miR-375錶達明顯低于T47D.結論 miRNA原位雜交操作能在常規固定併長期保存的石蠟組織標本上操作;蛋白酶K與探針的濃度應噹依據病理標本類型等多因素預實驗摸索;細胞水平的實時定量RT-PCR和爬片細胞原位雜交分析結果的比對為確定miRNA探針的特異性提供瞭幫助.
목적 탐토miRNA원위잡교기술적다충영향인소,이완선miRNA원위잡교분석방법.방법 선택불동조직래원、보존시간、절편후도적상규병리조직절편진행U6탐침적원위잡교분석;선택불동농도적단백매K대조직절편여MDA-MB-231파편세포진행U6탐침적원위잡교분석;실시정량RT-PCR방법화파편세포원위잡교대BT549、T47D세포주진행miR-375적표체분석.결과 불동조직래원、보존시간、절편후도적석사표본균능현시세포핵내적U6표체;조직절편원위잡교실험중,유선조직절편20 μg/ml적단백매K작용조교기타조적원위잡교효과호;간장조직절편200 μg/ml적단백매K작용조적현색최호;파편세포원위잡교실험중,2 μg/ml적단백매K작용조적현색경심;U6여miR-375적원위잡교최괄농도분별위1 ng/ml화100 ng/ml;실시정량RT-PCR화파편세포원위잡교결과균현시,BT 549적miR-375표체명현저우T47D.결론 miRNA원위잡교조작능재상규고정병장기보존적석사조직표본상조작;단백매K여탐침적농도응당의거병리표본류형등다인소예실험모색;세포수평적실시정량RT-PCR화파편세포원위잡교분석결과적비대위학정miRNA탐침적특이성제공료방조.
