中华损伤与修复杂志（电子版）
中華損傷與脩複雜誌（電子版）
중화손상여수복잡지（전자판）
Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing
2014年
6期
614-617
,共4页
阮琼芳%陈斓%赵超莉%叶子青%谢琼慧%谢卫国
阮瓊芳%陳斕%趙超莉%葉子青%謝瓊慧%謝衛國
원경방%진란%조초리%협자청%사경혜%사위국
缺氧%磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B%内皮细胞%细胞凋亡
缺氧%燐脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B%內皮細胞%細胞凋亡
결양%린지선기순3격매/단백격매B%내피세포%세포조망
Anoxia%Phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B%Endothelial cells%Apoptosis
目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（PI3 K／Akt）通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用。方法（1）常规培养人血管内皮细胞株EA．hy926细胞，取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为两组：正常对照组：置于气体成分体积分数5％二氧化碳培养箱中常规培养；缺氧组：置于气体成分体积分数1％氧气、5％二氧化碳和94％氮气的三气培养箱中进行缺氧培养。采用蛋白质印迹法检测正常对照组内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞中Akt活化状态（以pAkt／Akt值表示），流式细胞仪检测细胞凋亡率。（2）另取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为4组：正常对照组，缺氧组：培养方法同前，正常对照＋阻断剂组：用含50μmol／L的LY294002（PI3 K／Akt阻断剂）的培养液常规培养内皮细胞；缺氧＋阻断剂组：用含50μmol／L 的LY294002的培养液缺氧处理内皮细胞。均于培养3 h后收集内皮细胞，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。对Akt活化状态与细胞凋亡率行单因素方差分析和LSD-t检验。结果（1）正常对照组细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞pAkt／Akt值分别为0．67、0．79、0．34和0．35；正常内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h 的内皮细胞凋亡率分别为（3．11±0．21）％、（4．57±0．85）％、（6．93±0．58）％、（9．96±2．62）％，组间比较差异有统计学意义（F＝8．96，P＝0．030）。与正常对照组细胞比较，缺氧处理3、6 h的内皮细胞凋亡率升高，差异无统计学意义（t＝1．03、2．70，P＝0．360、0．054）；缺氧处理24 h的内皮细胞凋亡率显著升高，差异有统计学意义（t＝4．99，P＝0．008）。（2）正常对照组、正常对照＋阻断剂组、缺氧组、缺氧＋阻断剂组培养3 h后细胞凋亡率为（2．39±0．50）％、（5．77±1．21）％、（3．76±1．05）％、（19．54±4．85）％，组间比较差异有统计学意义（F＝23．47，P＜0．05）。与正常对照组比较，正常对照＋阻断剂组和缺氧组细胞凋亡率升高，但差异无统计学意义（t＝1．35、0．49，P＞0．05）。与缺氧组和正常对照＋阻断剂组比较，缺氧＋阻断剂组细胞凋亡率显著升高，差异有统计学意义（t＝6．95、5．88，P＜0．05）。结论 PI3K／Akt通路在缺氧内皮细胞损伤中具有抗凋亡作用，对缺氧内皮细胞损伤具有保护作用。
目的：探討燐脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（PI3 K／Akt）通路在缺氧血管內皮細胞凋亡中的作用。方法（1）常規培養人血管內皮細胞株EA．hy926細胞，取部分人血管內皮細胞株EA．hy926按照隨機數字錶法分為兩組：正常對照組：置于氣體成分體積分數5％二氧化碳培養箱中常規培養；缺氧組：置于氣體成分體積分數1％氧氣、5％二氧化碳和94％氮氣的三氣培養箱中進行缺氧培養。採用蛋白質印跡法檢測正常對照組內皮細胞和缺氧處理3、6、24 h的內皮細胞中Akt活化狀態（以pAkt／Akt值錶示），流式細胞儀檢測細胞凋亡率。（2）另取部分人血管內皮細胞株EA．hy926按照隨機數字錶法分為4組：正常對照組，缺氧組：培養方法同前，正常對照＋阻斷劑組：用含50μmol／L的LY294002（PI3 K／Akt阻斷劑）的培養液常規培養內皮細胞；缺氧＋阻斷劑組：用含50μmol／L 的LY294002的培養液缺氧處理內皮細胞。均于培養3 h後收集內皮細胞，採用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。對Akt活化狀態與細胞凋亡率行單因素方差分析和LSD-t檢驗。結果（1）正常對照組細胞和缺氧處理3、6、24 h的內皮細胞pAkt／Akt值分彆為0．67、0．79、0．34和0．35；正常內皮細胞和缺氧處理3、6、24 h 的內皮細胞凋亡率分彆為（3．11±0．21）％、（4．57±0．85）％、（6．93±0．58）％、（9．96±2．62）％，組間比較差異有統計學意義（F＝8．96，P＝0．030）。與正常對照組細胞比較，缺氧處理3、6 h的內皮細胞凋亡率升高，差異無統計學意義（t＝1．03、2．70，P＝0．360、0．054）；缺氧處理24 h的內皮細胞凋亡率顯著升高，差異有統計學意義（t＝4．99，P＝0．008）。（2）正常對照組、正常對照＋阻斷劑組、缺氧組、缺氧＋阻斷劑組培養3 h後細胞凋亡率為（2．39±0．50）％、（5．77±1．21）％、（3．76±1．05）％、（19．54±4．85）％，組間比較差異有統計學意義（F＝23．47，P＜0．05）。與正常對照組比較，正常對照＋阻斷劑組和缺氧組細胞凋亡率升高，但差異無統計學意義（t＝1．35、0．49，P＞0．05）。與缺氧組和正常對照＋阻斷劑組比較，缺氧＋阻斷劑組細胞凋亡率顯著升高，差異有統計學意義（t＝6．95、5．88，P＜0．05）。結論 PI3K／Akt通路在缺氧內皮細胞損傷中具有抗凋亡作用，對缺氧內皮細胞損傷具有保護作用。
목적：탐토린지선기순3격매／단백격매B（PI3 K／Akt）통로재결양혈관내피세포조망중적작용。방법（1）상규배양인혈관내피세포주EA．hy926세포，취부분인혈관내피세포주EA．hy926안조수궤수자표법분위량조：정상대조조：치우기체성분체적분수5％이양화탄배양상중상규배양；결양조：치우기체성분체적분수1％양기、5％이양화탄화94％담기적삼기배양상중진행결양배양。채용단백질인적법검측정상대조조내피세포화결양처리3、6、24 h적내피세포중Akt활화상태（이pAkt／Akt치표시），류식세포의검측세포조망솔。（2）령취부분인혈관내피세포주EA．hy926안조수궤수자표법분위4조：정상대조조，결양조：배양방법동전，정상대조＋조단제조：용함50μmol／L적LY294002（PI3 K／Akt조단제）적배양액상규배양내피세포；결양＋조단제조：용함50μmol／L 적LY294002적배양액결양처리내피세포。균우배양3 h후수집내피세포，채용류식세포의검측세포조망솔。대Akt활화상태여세포조망솔행단인소방차분석화LSD-t검험。결과（1）정상대조조세포화결양처리3、6、24 h적내피세포pAkt／Akt치분별위0．67、0．79、0．34화0．35；정상내피세포화결양처리3、6、24 h 적내피세포조망솔분별위（3．11±0．21）％、（4．57±0．85）％、（6．93±0．58）％、（9．96±2．62）％，조간비교차이유통계학의의（F＝8．96，P＝0．030）。여정상대조조세포비교，결양처리3、6 h적내피세포조망솔승고，차이무통계학의의（t＝1．03、2．70，P＝0．360、0．054）；결양처리24 h적내피세포조망솔현저승고，차이유통계학의의（t＝4．99，P＝0．008）。（2）정상대조조、정상대조＋조단제조、결양조、결양＋조단제조배양3 h후세포조망솔위（2．39±0．50）％、（5．77±1．21）％、（3．76±1．05）％、（19．54±4．85）％，조간비교차이유통계학의의（F＝23．47，P＜0．05）。여정상대조조비교，정상대조＋조단제조화결양조세포조망솔승고，단차이무통계학의의（t＝1．35、0．49，P＞0．05）。여결양조화정상대조＋조단제조비교，결양＋조단제조세포조망솔현저승고，차이유통계학의의（t＝6．95、5．88，P＜0．05）。결론 PI3K／Akt통로재결양내피세포손상중구유항조망작용，대결양내피세포손상구유보호작용。
Objective To explore the effect of phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B (PI3 K/Akt)signaling pathway on vascular endothelial apoptosis.Methods Endothelial cell line EA.hy926 was routinely cultured.One portion of endothelial cell line EA.hy926 were divided into 2 groups according to the random number table:control group (normoxia culture without any treatment),hypoxia group (hypoxia culture in hypoxic incubator which was filled with 1% oxygen,5% carbon dioxide and 94% nitrogen for 3, 6,24 h).The active of Akt in EA.hy926 cells were determined by Western blotting.Apoptosis rate of EA.hy926 cells was determined by flow cytometry.Another portion of endothelial cells were divided into 4 groups according to the random number table:control group,hypoxia group,control +inhibitor group (treated with normxia in culture medium adding final concentration of 50μmol/L LY294002),hypoxia +inhibitor group (treated with hypoxia in culture medium adding final concentration of 50 μmol/L LY294002).Apoptosis rate of EA.hy926 cells was determined by flow cytometry.Data were processed with one-way analysis of variance and LSD-t test.Results (1 )The protein expression level of pAkt/Akt in control group and in hypoxia group at post induce hours (PIH)3,6,24 were respectively 0.67,0.79,0.34 and 0.35.The apoptosis rates of EA.hy926 cells in control group and in hypoxia group at PIH 3,6,24 were respectively (3.11 ±0.21)%,(4.57 ±0.85)%,(6.93 ±0.58)%,(9.96 ±2.62)%(F=8.96,P=0.030).Compared with that in control group,the apoptosis rate of EA.hy926 in hypoxia group at PIH 3, 6 were increased (t =1.03,2.70,P=0.360,0.054),it was significantly increased in hypoxia group at PIH 24 (t=4.99,P=0.008).(2)The apoptosis rates of EA.hy926 cells in control group,control +inhibitor group,hypoxia group and hypoxia +inhibitor were respectively (2.39 ±0.50)%,(5.77 ± 1.21)%,(3.76 ±1.05)%,(19.54 ±4.85)%(F=23.47,P=0.01).Compared with that in control group,the apoptosis rates in control +inhibitor and in hypoxia group were increased (t=1.35,0.49,P>0.05 for all).Compared with that in hypoxia group and in control +inhibitor group,the apoptosis rate in hypoxia +inhibitor group was significantly increased (t=6.95,5.88,P<0.05 for all).Conclusion The anti-apoptotic effect of PI3 K/Akt signaling pathway could protect against hypoxia-induced apoptosis of endothelial cells.
