CAJ | 학술논문

目的：探讨六味地黄丸含药血清对兔退变椎间盘软骨终板细胞的保护作用。方法选择8月龄成年新西兰兔利用“异常应力负荷及椎间失稳法”建立新西兰兔腰椎椎间盘退变模型。病理切片确认模型成功后，取椎间盘分离下位软骨终板进行细胞培养，将生长良好的细胞随机分为含药组、损伤组与对照组。含药组体积分数为10％的六味地黄丸含药血清加体积分数为10％的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基；损伤组给予体积分数为10％的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基；对照组细胞培养用胎牛血清体积分数为10％的DMEM培养基。使用细胞增殖-毒性检测试剂盒（ CCk-8）检测各组兔退变椎间盘软骨终板细胞增殖的变化。TUNEL法计数软骨终板活细胞与凋亡细胞数量，RT-PCR测定其Fas/FasL的表达水平。结果对照组软骨终板细胞初期正常生长，增殖良好，随着时间延长，软骨终板细胞数量减少，凋亡细胞数量增多，细胞外基质胶原减少，细胞形态变化快。损伤组能够明显抑制椎间盘软骨终板细胞的增殖，软骨细胞及细胞外基质胶原数量减少明显，同一时间点比较，软骨细胞凋亡数量增多，与对照组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。而含药组软骨终板细胞增殖缓慢，软骨细胞下降少，细胞凋亡数量减少，细胞外基质胶原成分下降不明显，3组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组软骨终板内Fas/FasL的表达水平随时间逐渐增强，同期比较，损伤组Fas/FasL表达水平高于对照组，而含药组软骨终板水平Fas/FasL较损伤组表达明显下降，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论六味地黄丸含药血清能够抑制TNF-α诱导的兔退变椎间盘软骨终板细胞损伤，减少软骨细胞凋亡，起到延缓椎间盘损伤的作用，其机制可能与抑制Fas/FasL基因在退变椎间盘软骨终板中的过度表达有关。目的：探討六味地黃汍含藥血清對兔退變椎間盤軟骨終闆細胞的保護作用。方法選擇8月齡成年新西蘭兔利用“異常應力負荷及椎間失穩法”建立新西蘭兔腰椎椎間盤退變模型。病理切片確認模型成功後，取椎間盤分離下位軟骨終闆進行細胞培養，將生長良好的細胞隨機分為含藥組、損傷組與對照組。含藥組體積分數為10％的六味地黃汍含藥血清加體積分數為10％的胎牛血清與濃度為5μg·L-1的TNF-α混閤的DMEM培養基；損傷組給予體積分數為10％的胎牛血清與濃度為5μg·L-1的TNF-α混閤的DMEM培養基；對照組細胞培養用胎牛血清體積分數為10％的DMEM培養基。使用細胞增殖-毒性檢測試劑盒（ CCk-8）檢測各組兔退變椎間盤軟骨終闆細胞增殖的變化。TUNEL法計數軟骨終闆活細胞與凋亡細胞數量，RT-PCR測定其Fas/FasL的錶達水平。結果對照組軟骨終闆細胞初期正常生長，增殖良好，隨著時間延長，軟骨終闆細胞數量減少，凋亡細胞數量增多，細胞外基質膠原減少，細胞形態變化快。損傷組能夠明顯抑製椎間盤軟骨終闆細胞的增殖，軟骨細胞及細胞外基質膠原數量減少明顯，同一時間點比較，軟骨細胞凋亡數量增多，與對照組比較差異有統計學意義（ P＜0.05）。而含藥組軟骨終闆細胞增殖緩慢，軟骨細胞下降少，細胞凋亡數量減少，細胞外基質膠原成分下降不明顯，3組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。對照組軟骨終闆內Fas/FasL的錶達水平隨時間逐漸增彊，同期比較，損傷組Fas/FasL錶達水平高于對照組，而含藥組軟骨終闆水平Fas/FasL較損傷組錶達明顯下降，差異有統計學意義（ P＜0.05）。結論六味地黃汍含藥血清能夠抑製TNF-α誘導的兔退變椎間盤軟骨終闆細胞損傷，減少軟骨細胞凋亡，起到延緩椎間盤損傷的作用，其機製可能與抑製Fas/FasL基因在退變椎間盤軟骨終闆中的過度錶達有關。
목적：탐토륙미지황환함약혈청대토퇴변추간반연골종판세포적보호작용。방법선택8월령성년신서란토이용“이상응력부하급추간실은법”건립신서란토요추추간반퇴변모형。병리절편학인모형성공후，취추간반분리하위연골종판진행세포배양，장생장량호적세포수궤분위함약조、손상조여대조조。함약조체적분수위10％적륙미지황환함약혈청가체적분수위10％적태우혈청여농도위5μg·L-1적TNF-α혼합적DMEM배양기；손상조급여체적분수위10％적태우혈청여농도위5μg·L-1적TNF-α혼합적DMEM배양기；대조조세포배양용태우혈청체적분수위10％적DMEM배양기。사용세포증식-독성검측시제합（ CCk-8）검측각조토퇴변추간반연골종판세포증식적변화。TUNEL법계수연골종판활세포여조망세포수량，RT-PCR측정기Fas/FasL적표체수평。결과대조조연골종판세포초기정상생장，증식량호，수착시간연장，연골종판세포수량감소，조망세포수량증다，세포외기질효원감소，세포형태변화쾌。손상조능구명현억제추간반연골종판세포적증식，연골세포급세포외기질효원수량감소명현，동일시간점비교，연골세포조망수량증다，여대조조비교차이유통계학의의（ P＜0.05）。이함약조연골종판세포증식완만，연골세포하강소，세포조망수량감소，세포외기질효원성분하강불명현，3조간비교차이유통계학의의（P＜0.05）。대조조연골종판내Fas/FasL적표체수평수시간축점증강，동기비교，손상조Fas/FasL표체수평고우대조조，이함약조연골종판수평Fas/FasL교손상조표체명현하강，차이유통계학의의（ P＜0.05）。결론륙미지황환함약혈청능구억제TNF-α유도적토퇴변추간반연골종판세포손상，감소연골세포조망，기도연완추간반손상적작용，기궤제가능여억제Fas/FasL기인재퇴변추간반연골종판중적과도표체유관。