临床皮肤科杂志
臨床皮膚科雜誌
림상피부과잡지
JOURNAL OF CLINICAL DERMATOLOGY
2014年
12期
703-706
,共4页
侯巍%郑跃%许庆芳%刘晨%陆春%赖维
侯巍%鄭躍%許慶芳%劉晨%陸春%賴維
후외%정약%허경방%류신%륙춘%뢰유
光老化%急性光损伤%皮肤成纤维细胞
光老化%急性光損傷%皮膚成纖維細胞
광노화%급성광손상%피부성섬유세포
photoaging%acute photodamage%dermal fibroblast
目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法.方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4～8代的细胞进行实验.用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性.慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24 h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9 J/cm2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10％胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率.结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关.UVA在剂量为≤10 J/cm2时,细胞存活率保持在＞85％;而UVA剂量≥15 J/cm2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm2时存活率为50％左右,至25 J/cm2时仅为约25％.慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率＞95％.结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型.
目的:探討人皮膚成纖維細胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光損傷模型建立的方法.方法:體外培養原代人皮膚成纖維細胞,選取第4～8代的細胞進行實驗.用長波紫外線(UVA)單次照射建立HDFs急性光損傷模型,熒光倒置顯微鏡觀察不同劑量UVA照射後第1、2、3天HDFs的形態變化;CCK-8法檢測照射後HDFs的增殖活性.慢性光損傷HDFs模型採用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育細胞24 h,隨後以含8-MOP的燐痠鹽緩遲液(PBS)置換培養基,行9 J/cm2 UVA照射,照射完成後換Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)(含10％胎牛血清)避光傳代培養,21d後顯微鏡下觀察HDFs形態;衰老相關-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法計算衰老細胞率.結果:單次UVA照射導緻HDFs增殖率下降,與UVA劑量呈正相關.UVA在劑量為≤10 J/cm2時,細胞存活率保持在＞85％;而UVA劑量≥15 J/cm2時細胞存活率明顯降低;≥20 J/cm2時存活率為50％左右,至25 J/cm2時僅為約25％.慢性光損傷HDFs誘導組(即UVA+MOP組)幾乎所有細胞均齣現體積變大、細胞顆粒增加等細胞老化的特徵性改變;SA-β-Gal染色細胞的暘性率＞95％.結論:UVA單次照射可成功建立HDFs急性光損傷模型,UVA聯閤8-MOP構建HDFs慢性光損傷模型.
목적:탐토인피부성섬유세포(human dermal fibroblasts,HDFs)급성화만성광손상모형건립적방법.방법:체외배양원대인피부성섬유세포,선취제4～8대적세포진행실험.용장파자외선(UVA)단차조사건립HDFs급성광손상모형,형광도치현미경관찰불동제량UVA조사후제1、2、3천HDFs적형태변화;CCK-8법검측조사후HDFs적증식활성.만성광손상HDFs모형채용8-갑양사림(8-MOP)피광부육세포24 h,수후이함8-MOP적린산염완충액(PBS)치환배양기,행9 J/cm2 UVA조사,조사완성후환Dulbecco개량Eagle배양기(DMEM)(함10％태우혈청)피광전대배양,21d후현미경하관찰HDFs형태;쇠로상관-β-반유당감매(SA-β-Gal)염색법계산쇠로세포솔.결과:단차UVA조사도치HDFs증식솔하강,여UVA제량정정상관.UVA재제량위≤10 J/cm2시,세포존활솔보지재＞85％;이UVA제량≥15 J/cm2시세포존활솔명현강저;≥20 J/cm2시존활솔위50％좌우,지25 J/cm2시부위약25％.만성광손상HDFs유도조(즉UVA+MOP조)궤호소유세포균출현체적변대、세포과립증가등세포노화적특정성개변;SA-β-Gal염색세포적양성솔＞95％.결론:UVA단차조사가성공건립HDFs급성광손상모형,UVA연합8-MOP구건HDFs만성광손상모형.
