山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2014年
12期
1119-1123,1231
,共6页
李菁华%刘震雄%赵曙光%张哲%闻勤生%王景杰%张明鑫
李菁華%劉震雄%趙曙光%張哲%聞勤生%王景傑%張明鑫
리정화%류진웅%조서광%장철%문근생%왕경걸%장명흠
Nrf2%短发夹状RNA%慢病毒载体%HSC-T6
Nrf2%短髮夾狀RNA%慢病毒載體%HSC-T6
Nrf2%단발협상RNA%만병독재체%HSC-T6
Nrf2%short hairpin RNA%lentiviral vector%HSC-T6 cells
目的 设计以NF-E2-related factor2(Nrf2)基因为靶点的短发夹状RNA (shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染大鼠肝星状细胞株HSC-T6,观察其对Nrf2表达的影响. 方法 应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染72 h和96 h后大鼠肝星状细胞株HSC-T6 Nrf2基因的表达情况. 结果 测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109 TU/ml,pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA转染后72 h和96 h可抑制Nrf2基因mRNA及蛋白的表达. 结论 成功构建Nrf2基因的shRNA慢病毒载体,可有效抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6中Nrf2基因的表达.
目的 設計以NF-E2-related factor2(Nrf2)基因為靶點的短髮夾狀RNA (shRNA),構建重組慢病毒錶達載體併轉染大鼠肝星狀細胞株HSC-T6,觀察其對Nrf2錶達的影響. 方法 應用重組DNA技術,將設計好的4條基因特異性shRNA序列插至慢病毒錶達載體pGLV3-GFP中,構建pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,併應用脂質體法轉染293T細胞,進行病毒包裝及滴度測定.採用實時熒光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分彆從mRNA和蛋白水平檢測轉染72 h和96 h後大鼠肝星狀細胞株HSC-T6 Nrf2基因的錶達情況. 結果 測序證實慢病毒載體構建成功,併測定滴度為1×109 TU/ml,pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA轉染後72 h和96 h可抑製Nrf2基因mRNA及蛋白的錶達. 結論 成功構建Nrf2基因的shRNA慢病毒載體,可有效抑製大鼠肝星狀細胞株HSC-T6中Nrf2基因的錶達.
목적 설계이NF-E2-related factor2(Nrf2)기인위파점적단발협상RNA (shRNA),구건중조만병독표체재체병전염대서간성상세포주HSC-T6,관찰기대Nrf2표체적영향. 방법 응용중조DNA기술,장설계호적4조기인특이성shRNA서렬삽지만병독표체재체pGLV3-GFP중,구건pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,병응용지질체법전염293T세포,진행병독포장급적도측정.채용실시형광정량PCR(RT-PCR)급Western blot분별종mRNA화단백수평검측전염72 h화96 h후대서간성상세포주HSC-T6 Nrf2기인적표체정황. 결과 측서증실만병독재체구건성공,병측정적도위1×109 TU/ml,pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA전염후72 h화96 h가억제Nrf2기인mRNA급단백적표체. 결론 성공구건Nrf2기인적shRNA만병독재체,가유효억제대서간성상세포주HSC-T6중Nrf2기인적표체.
