广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
1期
133-137
,共5页
何海旺%谭冠宁%何虎翼%何新民%王晖%李丽淑%唐洲萍
何海旺%譚冠寧%何虎翼%何新民%王暉%李麗淑%唐洲萍
하해왕%담관저%하호익%하신민%왕휘%리려숙%당주평
马铃薯%ISSR%反应体系优化%引物筛选
馬鈴藷%ISSR%反應體繫優化%引物篩選
마령서%ISSR%반응체계우화%인물사선
为得出马铃薯ISSR-PCR最佳的反应体系,采用正交试验设计,对rTaq DNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs和引物进行5因素4水平筛选.结果表明,马铃薯ISSR-PCR的最佳反应体系为:总体积25 μL的反应体系中含有rTaq DNA聚合酶0.5 U、Mg2+浓度为2.5 mmol/L、模板DNA用量为75 ng、dNTPs浓度为200 μmol/L、引物浓度为0.8 μmol/L.这些因素对PCR反应的影响大小顺序为Mg2+浓度＞rTaq DNA聚合酶用量＞dNTPs浓度=引物浓度＞模板DNA用量.应用该最佳反应体系对39条ISSR引物进行筛选,得出15条条带清晰、条带数多、重复性好的引物.并通过退火温度梯度试验得出筛选引物的最佳退火温度.
為得齣馬鈴藷ISSR-PCR最佳的反應體繫,採用正交試驗設計,對rTaq DNA聚閤酶、Mg2+、模闆DNA、dNTPs和引物進行5因素4水平篩選.結果錶明,馬鈴藷ISSR-PCR的最佳反應體繫為:總體積25 μL的反應體繫中含有rTaq DNA聚閤酶0.5 U、Mg2+濃度為2.5 mmol/L、模闆DNA用量為75 ng、dNTPs濃度為200 μmol/L、引物濃度為0.8 μmol/L.這些因素對PCR反應的影響大小順序為Mg2+濃度＞rTaq DNA聚閤酶用量＞dNTPs濃度=引物濃度＞模闆DNA用量.應用該最佳反應體繫對39條ISSR引物進行篩選,得齣15條條帶清晰、條帶數多、重複性好的引物.併通過退火溫度梯度試驗得齣篩選引物的最佳退火溫度.
위득출마령서ISSR-PCR최가적반응체계,채용정교시험설계,대rTaq DNA취합매、Mg2+、모판DNA、dNTPs화인물진행5인소4수평사선.결과표명,마령서ISSR-PCR적최가반응체계위:총체적25 μL적반응체계중함유rTaq DNA취합매0.5 U、Mg2+농도위2.5 mmol/L、모판DNA용량위75 ng、dNTPs농도위200 μmol/L、인물농도위0.8 μmol/L.저사인소대PCR반응적영향대소순서위Mg2+농도＞rTaq DNA취합매용량＞dNTPs농도=인물농도＞모판DNA용량.응용해최가반응체계대39조ISSR인물진행사선,득출15조조대청석、조대수다、중복성호적인물.병통과퇴화온도제도시험득출사선인물적최가퇴화온도.
