生殖医学杂志
生殖醫學雜誌
생식의학잡지
JOURNAL OF REPRODUCTIVE MEDICINE
2015年
1期
51-57
,共7页
邵丽%张奕辉%徐祎欣%严正杰%刘嘉茵%千日成%崔毓桂
邵麗%張奕輝%徐祎訢%嚴正傑%劉嘉茵%韆日成%崔毓桂
소려%장혁휘%서의흔%엄정걸%류가인%천일성%최육계
卵丘细胞%细胞周期蛋白D2%卵丘-卵母细胞复合体%卵母细胞体外成熟%细胞增殖
卵丘細胞%細胞週期蛋白D2%卵丘-卵母細胞複閤體%卵母細胞體外成熟%細胞增殖
란구세포%세포주기단백D2%란구-란모세포복합체%란모세포체외성숙%세포증식
Cumulus cells%Cyclin D2%Cumulus-oocyte complex%Ooocyte in vitro maturation%Cell proliferation
目的 检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用. 方法 从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs).收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2 mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位.结果 GV-CCs的CCND2 mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P＜0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P＜0.01).免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV CCs减弱. 结论 卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程.
目的 檢測在小鼠卵母細胞體外成熟過程中卵丘細胞(CCs)上細胞週期蛋白D2(CCND2)錶達水平的變化,探討其在卵母細胞成熟中的作用. 方法 從3週齡雌性ICR小鼠穫取GV期卵丘-卵母細胞複閤體(GV-COCs),體外培養至MⅡ期卵丘-卵母細胞複閤體(MⅡ-COCs).收集對應的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二組,實時定量逆轉錄聚閤酶鏈反應和蛋白印跡方法檢測CCND2 mRNA和蛋白水平的錶達;激光共聚焦免疫熒光技術觀察COCs成熟前後CCND2的亞細胞定位.結果 GV-CCs的CCND2 mRNA相對錶達量(7.03±1.11),顯著高于MⅡ-CCs組(1.40±0.11)(P＜0.01);同樣,GVCCs組CCND2蛋白相對錶達水平(1.98±0.16)也顯著高于MⅡ-CCs組(1.16±0.14)(P＜0.01).免疫熒光顯示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母細胞亦有錶達;CCs中CCND2主要定位于胞覈,胞質中少量錶達,且GV-CCs主要錶達在內層CCs,而MⅡ-CCs則失去這種錶達極性,同時MⅡ-CCs的錶達彊度較GV CCs減弱. 結論 卵母細胞體外成熟培養過程中,其週圍的CCs上CCND2錶達水平下降,且伴隨細胞定位的改變,提示CCs上CCND2與卵母細胞成熟密切相關,可能參與瞭卵母細胞成熟過程.
목적 검측재소서란모세포체외성숙과정중란구세포(CCs)상세포주기단백D2(CCND2)표체수평적변화,탐토기재란모세포성숙중적작용. 방법 종3주령자성ICR소서획취GV기란구-란모세포복합체(GV-COCs),체외배양지MⅡ기란구-란모세포복합체(MⅡ-COCs).수집대응적CCs,분성GV-CCs화MⅡ-CCs이조,실시정량역전록취합매련반응화단백인적방법검측CCND2 mRNA화단백수평적표체;격광공취초면역형광기술관찰COCs성숙전후CCND2적아세포정위.결과 GV-CCs적CCND2 mRNA상대표체량(7.03±1.11),현저고우MⅡ-CCs조(1.40±0.11)(P＜0.01);동양,GVCCs조CCND2단백상대표체수평(1.98±0.16)야현저고우MⅡ-CCs조(1.16±0.14)(P＜0.01).면역형광현시,COCs중CCND2정위우CCs,란모세포역유표체;CCs중CCND2주요정위우포핵,포질중소량표체,차GV-CCs주요표체재내층CCs,이MⅡ-CCs칙실거저충표체겁성,동시MⅡ-CCs적표체강도교GV CCs감약. 결론 란모세포체외성숙배양과정중,기주위적CCs상CCND2표체수평하강,차반수세포정위적개변,제시CCs상CCND2여란모세포성숙밀절상관,가능삼여료란모세포성숙과정.
