中国神经免疫学和神经病学杂志
中國神經免疫學和神經病學雜誌
중국신경면역학화신경병학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY AND
2015年
1期
4-8
,共5页
孙超%袁媛%郑鹏飞%高星%赵元琳%李乐%常婷%李柱一
孫超%袁媛%鄭鵬飛%高星%趙元琳%李樂%常婷%李柱一
손초%원원%정붕비%고성%조원림%리악%상정%리주일
重症肌无力%未成熟树突状细胞%融合单链抗体%CD205
重癥肌無力%未成熟樹突狀細胞%融閤單鏈抗體%CD205
중증기무력%미성숙수돌상세포%융합단련항체%CD205
myasthenia gravis%immature dendritic cell%fusion single chain antibody fragment%CD205
目的 构建小鼠AChR (m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础.方法 分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)10 ng/mL和白细胞介素4(IL-4)10 ng/mL刺激培养,经脂多糖(LPS)1 ng/mL诱导24 h后,高倍显微镜及扫描电镜观察细胞形态;流式细胞术(FCM)检测细胞表面相关分子表达,对iDC表型进行鉴定;构建原核表达载体m97-116scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) 18℃诱导表达18 h,镍(Nj)柱纯化,SDS-PAGE和Western blot检测融合单链抗体m97-116-scFv205表达及纯化;FCM检测其与iDC的亲和力.结果 形态学观察提示培养细胞为DC,FCM结果显示培养细胞符合iDC表型;SDS-PAGE和Western blot在上清中检测到m97-116-scFv205可溶性表达;亲和力检测显示m97-116-scFv205与iDC具有较高亲和力.结论 成功构建并表达m97-116-scFv205融合单链抗体,该抗体与iDC具有较高的亲和力,为下一步靶向iDC诱导AChR特异性免疫耐受治疗重症肌无力奠定了良好的实验基础.
目的 構建小鼠AChR (m97-116)肽段-CD205融閤單鏈抗體原覈錶達載體,錶達融閤單鏈抗體(m97-116-scFv205),檢測其對未成熟樹突狀細胞(iDC)的親和力,為通過iDC誘導AChR特異性免疫耐受提供實驗基礎.方法 分離培養小鼠原代骨髓祖細胞,經粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)10 ng/mL和白細胞介素4(IL-4)10 ng/mL刺激培養,經脂多糖(LPS)1 ng/mL誘導24 h後,高倍顯微鏡及掃描電鏡觀察細胞形態;流式細胞術(FCM)檢測細胞錶麵相關分子錶達,對iDC錶型進行鑒定;構建原覈錶達載體m97-116scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL異丙基硫代半乳糖苷(IPTG) 18℃誘導錶達18 h,鎳(Nj)柱純化,SDS-PAGE和Western blot檢測融閤單鏈抗體m97-116-scFv205錶達及純化;FCM檢測其與iDC的親和力.結果 形態學觀察提示培養細胞為DC,FCM結果顯示培養細胞符閤iDC錶型;SDS-PAGE和Western blot在上清中檢測到m97-116-scFv205可溶性錶達;親和力檢測顯示m97-116-scFv205與iDC具有較高親和力.結論 成功構建併錶達m97-116-scFv205融閤單鏈抗體,該抗體與iDC具有較高的親和力,為下一步靶嚮iDC誘導AChR特異性免疫耐受治療重癥肌無力奠定瞭良好的實驗基礎.
목적 구건소서AChR (m97-116)태단-CD205융합단련항체원핵표체재체,표체융합단련항체(m97-116-scFv205),검측기대미성숙수돌상세포(iDC)적친화력,위통과iDC유도AChR특이성면역내수제공실험기출.방법 분리배양소서원대골수조세포,경립세포-거서세포집락자격인자(GM-CSF)10 ng/mL화백세포개소4(IL-4)10 ng/mL자격배양,경지다당(LPS)1 ng/mL유도24 h후,고배현미경급소묘전경관찰세포형태;류식세포술(FCM)검측세포표면상관분자표체,대iDC표형진행감정;구건원핵표체재체m97-116scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL이병기류대반유당감(IPTG) 18℃유도표체18 h,얼(Nj)주순화,SDS-PAGE화Western blot검측융합단련항체m97-116-scFv205표체급순화;FCM검측기여iDC적친화력.결과 형태학관찰제시배양세포위DC,FCM결과현시배양세포부합iDC표형;SDS-PAGE화Western blot재상청중검측도m97-116-scFv205가용성표체;친화력검측현시m97-116-scFv205여iDC구유교고친화력.결론 성공구건병표체m97-116-scFv205융합단련항체,해항체여iDC구유교고적친화력,위하일보파향iDC유도AChR특이성면역내수치료중증기무력전정료량호적실험기출.
