医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2015年
2期
35-39
,共5页
张姣丽%贾小芳%尹林%刘晓茜%吕建新%张丽军
張姣麗%賈小芳%尹林%劉曉茜%呂建新%張麗軍
장교려%가소방%윤림%류효천%려건신%장려군
蛋白质%多反应监测%定量%液相色谱串联质谱
蛋白質%多反應鑑測%定量%液相色譜串聯質譜
단백질%다반응감측%정량%액상색보천련질보
Protein%Multiple reaction monitoring (MRM)%Quantification%Liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS)
目的 建立液质联用多反应监测方法定量复杂样品中的蛋白质.方法 合成标准多肽,建立较通用的蛋白质多肽定量方法;挑选目标蛋白质及其定量离子对.采用SDS-PAGE方法分离复杂样品中的蛋白质,切取目标蛋白质条带进行胶内酶解和液质联用MRM定量,运用定量PCR方法分析目标蛋白在蛋白质和mRNA水平的一致性.结果 选择在二维凝胶电泳中具有3倍差异的ATPA蛋白质进行了MRM定量分析,ATPA的4条多肽513.8、586.4、644.5和777.3对应的10个离子对均能特异地被质谱MRM方法检测,与正常对照相比,酒精性肝纤维化样本中ATPA的10个离子的曲线下面积变化基本一致,均表现为上调.MRM定量结果也表明ATPA在酒精性肝纤维化样品中上调了3.19倍,与二维凝胶电泳检测结果一致.进一步的定量PCR分析结果显示,该蛋白质的表达变化同步发生在mRNA和蛋白质水平.结论 本研究构建了一种简单有效的液质联用MRM定量SDS-PAGE分离的复杂样品中蛋白质的方法.
目的 建立液質聯用多反應鑑測方法定量複雜樣品中的蛋白質.方法 閤成標準多肽,建立較通用的蛋白質多肽定量方法;挑選目標蛋白質及其定量離子對.採用SDS-PAGE方法分離複雜樣品中的蛋白質,切取目標蛋白質條帶進行膠內酶解和液質聯用MRM定量,運用定量PCR方法分析目標蛋白在蛋白質和mRNA水平的一緻性.結果 選擇在二維凝膠電泳中具有3倍差異的ATPA蛋白質進行瞭MRM定量分析,ATPA的4條多肽513.8、586.4、644.5和777.3對應的10箇離子對均能特異地被質譜MRM方法檢測,與正常對照相比,酒精性肝纖維化樣本中ATPA的10箇離子的麯線下麵積變化基本一緻,均錶現為上調.MRM定量結果也錶明ATPA在酒精性肝纖維化樣品中上調瞭3.19倍,與二維凝膠電泳檢測結果一緻.進一步的定量PCR分析結果顯示,該蛋白質的錶達變化同步髮生在mRNA和蛋白質水平.結論 本研究構建瞭一種簡單有效的液質聯用MRM定量SDS-PAGE分離的複雜樣品中蛋白質的方法.
목적 건립액질련용다반응감측방법정량복잡양품중적단백질.방법 합성표준다태,건립교통용적단백질다태정량방법;도선목표단백질급기정량리자대.채용SDS-PAGE방법분리복잡양품중적단백질,절취목표단백질조대진행효내매해화액질련용MRM정량,운용정량PCR방법분석목표단백재단백질화mRNA수평적일치성.결과 선택재이유응효전영중구유3배차이적ATPA단백질진행료MRM정량분석,ATPA적4조다태513.8、586.4、644.5화777.3대응적10개리자대균능특이지피질보MRM방법검측,여정상대조상비,주정성간섬유화양본중ATPA적10개리자적곡선하면적변화기본일치,균표현위상조.MRM정량결과야표명ATPA재주정성간섬유화양품중상조료3.19배,여이유응효전영검측결과일치.진일보적정량PCR분석결과현시,해단백질적표체변화동보발생재mRNA화단백질수평.결론 본연구구건료일충간단유효적액질련용MRM정량SDS-PAGE분리적복잡양품중단백질적방법.
