广东畜牧兽医科技
廣東畜牧獸醫科技
엄동축목수의과기
GUANDONG JOURNAL OF ANIMAL AND VETERINARY SCIENCE
2015年
1期
29-33
,共5页
孙敏华%李林林%董嘉文%袁建丰%邝瑞欢%胡奇林
孫敏華%李林林%董嘉文%袁建豐%鄺瑞歡%鬍奇林
손민화%리림림%동가문%원건봉%광서환%호기림
鸭坦布苏病毒%产蛋下降综合征病毒%二重PCR
鴨坦佈囌病毒%產蛋下降綜閤徵病毒%二重PCR
압탄포소병독%산단하강종합정병독%이중PCR
参考GenBank上已发表的鸭坦布苏病毒(DTMUV)NS5基因序列和产蛋下降综合征病毒(EDSV)五邻体(penton)基因序列,分别设计了检测DTMUV和EDSV的特异性引物,扩增目的片段大小分别为242 bp和181 bp.通过退火温度及引物浓度的优化,建立了针对这两种病毒的二重PCR检测方法.特异性试验结果表明,该方法可以同时检测DTMUV和EDSV,且不与鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、番鸭呼肠孤病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒以及大肠杆菌的核酸发生交叉反应;敏感性试验表明,该方法对DTMUV 的最低检出限为590个拷贝,对EDSV的最低检出限为3 260个拷贝;该方法重复性良好,对不同批次的样品扩增效果良好.通过检测两种病毒感染的阳性病料各1 0份,结果显示,该二重PCR检测方法对阳性样品的检出率可达100％.这表明该方法可以用于鸭坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒的检测.
參攷GenBank上已髮錶的鴨坦佈囌病毒(DTMUV)NS5基因序列和產蛋下降綜閤徵病毒(EDSV)五鄰體(penton)基因序列,分彆設計瞭檢測DTMUV和EDSV的特異性引物,擴增目的片段大小分彆為242 bp和181 bp.通過退火溫度及引物濃度的優化,建立瞭針對這兩種病毒的二重PCR檢測方法.特異性試驗結果錶明,該方法可以同時檢測DTMUV和EDSV,且不與鴨肝炎病毒、鴨瘟病毒、番鴨呼腸孤病毒、小鵝瘟病毒、番鴨細小病毒、H9亞型禽流感病毒、新城疫病毒以及大腸桿菌的覈痠髮生交扠反應;敏感性試驗錶明,該方法對DTMUV 的最低檢齣限為590箇拷貝,對EDSV的最低檢齣限為3 260箇拷貝;該方法重複性良好,對不同批次的樣品擴增效果良好.通過檢測兩種病毒感染的暘性病料各1 0份,結果顯示,該二重PCR檢測方法對暘性樣品的檢齣率可達100％.這錶明該方法可以用于鴨坦佈囌病毒和產蛋下降綜閤徵病毒的檢測.
삼고GenBank상이발표적압탄포소병독(DTMUV)NS5기인서렬화산단하강종합정병독(EDSV)오린체(penton)기인서렬,분별설계료검측DTMUV화EDSV적특이성인물,확증목적편단대소분별위242 bp화181 bp.통과퇴화온도급인물농도적우화,건립료침대저량충병독적이중PCR검측방법.특이성시험결과표명,해방법가이동시검측DTMUV화EDSV,차불여압간염병독、압온병독、번압호장고병독、소아온병독、번압세소병독、H9아형금류감병독、신성역병독이급대장간균적핵산발생교차반응;민감성시험표명,해방법대DTMUV 적최저검출한위590개고패,대EDSV적최저검출한위3 260개고패;해방법중복성량호,대불동비차적양품확증효과량호.통과검측량충병독감염적양성병료각1 0빈,결과현시,해이중PCR검측방법대양성양품적검출솔가체100％.저표명해방법가이용우압탄포소병독화산단하강종합정병독적검측.
