天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2015年
1期
34-37
,共4页
肿瘤抑制蛋白质类%tau蛋白质类%细胞骨架%逆转录聚合酶链反应%免疫荧光测定%第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因
腫瘤抑製蛋白質類%tau蛋白質類%細胞骨架%逆轉錄聚閤酶鏈反應%免疫熒光測定%第10號染色體缺失的燐痠酶及張力蛋白同源物基因
종류억제단백질류%tau단백질류%세포골가%역전록취합매련반응%면역형광측정%제10호염색체결실적린산매급장력단백동원물기인
tumor suppressor proteins%tau proteins%cytoskeleton%reverse transcriptase polymerase chain reaction%fluo-roimmunoassay%phosphatase and tensin homolog deleted in chronlosome 10
目的：观察体外诱导成人骨髓基质干细胞（BMSC）向神经细胞分化过程中，在第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）调节细胞骨架中轴突标志分子微管相关蛋白tau（MAPT）分布及聚集的特征，并探讨其意义。方法从成人骨髓中分离基质干细胞，在体外经细胞因子诱导分化2周后成为神经样细胞，将未分化的BMSC作为对照组；应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法研究MAPT的表达变化；经PTEN抑制剂BPV作用于该细胞后，用结合有荧光剂的鬼笔环肽直接染色细胞微丝肌动蛋白，并联合用免疫荧光细胞化学方法染色MAPT，在激光共聚焦显微镜下观察MAPT和肌动蛋白的定位及关联性。结果成人骨髓来源的基质干细胞经诱导分化后，MAPT的mRNA在分化1周和2周时相对表达水平为0.24±0.04和0.52±0.04，高于对照组BMSC的0.04±0.02（P＜0.05）。MAPT蛋白表达水平分别为0.18±0.03和0.44±0.05，高于对照组0.06±0.04（P＜0.05）。细胞染色后，经BPV作用后MAPT由弥散状态变为聚集状态，并分布于细胞一侧，神经样细胞开始出现极性。结论 BMSC来源的神经细胞分化成熟时，PTEN参与调节细胞骨架中轴突标志分子MAPT的转运和聚集，为神经细胞的轴突进一步生长提供物质支持。
目的：觀察體外誘導成人骨髓基質榦細胞（BMSC）嚮神經細胞分化過程中，在第10號染色體缺失的燐痠酶及張力蛋白同源物基因（PTEN）調節細胞骨架中軸突標誌分子微管相關蛋白tau（MAPT）分佈及聚集的特徵，併探討其意義。方法從成人骨髓中分離基質榦細胞，在體外經細胞因子誘導分化2週後成為神經樣細胞，將未分化的BMSC作為對照組；應用半定量逆轉錄-聚閤酶鏈反應（RT-PCR）和Western blot方法研究MAPT的錶達變化；經PTEN抑製劑BPV作用于該細胞後，用結閤有熒光劑的鬼筆環肽直接染色細胞微絲肌動蛋白，併聯閤用免疫熒光細胞化學方法染色MAPT，在激光共聚焦顯微鏡下觀察MAPT和肌動蛋白的定位及關聯性。結果成人骨髓來源的基質榦細胞經誘導分化後，MAPT的mRNA在分化1週和2週時相對錶達水平為0.24±0.04和0.52±0.04，高于對照組BMSC的0.04±0.02（P＜0.05）。MAPT蛋白錶達水平分彆為0.18±0.03和0.44±0.05，高于對照組0.06±0.04（P＜0.05）。細胞染色後，經BPV作用後MAPT由瀰散狀態變為聚集狀態，併分佈于細胞一側，神經樣細胞開始齣現極性。結論 BMSC來源的神經細胞分化成熟時，PTEN參與調節細胞骨架中軸突標誌分子MAPT的轉運和聚集，為神經細胞的軸突進一步生長提供物質支持。
목적：관찰체외유도성인골수기질간세포（BMSC）향신경세포분화과정중，재제10호염색체결실적린산매급장력단백동원물기인（PTEN）조절세포골가중축돌표지분자미관상관단백tau（MAPT）분포급취집적특정，병탐토기의의。방법종성인골수중분리기질간세포，재체외경세포인자유도분화2주후성위신경양세포，장미분화적BMSC작위대조조；응용반정량역전록-취합매련반응（RT-PCR）화Western blot방법연구MAPT적표체변화；경PTEN억제제BPV작용우해세포후，용결합유형광제적귀필배태직접염색세포미사기동단백，병연합용면역형광세포화학방법염색MAPT，재격광공취초현미경하관찰MAPT화기동단백적정위급관련성。결과성인골수래원적기질간세포경유도분화후，MAPT적mRNA재분화1주화2주시상대표체수평위0.24±0.04화0.52±0.04，고우대조조BMSC적0.04±0.02（P＜0.05）。MAPT단백표체수평분별위0.18±0.03화0.44±0.05，고우대조조0.06±0.04（P＜0.05）。세포염색후，경BPV작용후MAPT유미산상태변위취집상태，병분포우세포일측，신경양세포개시출현겁성。결론 BMSC래원적신경세포분화성숙시，PTEN삼여조절세포골가중축돌표지분자MAPT적전운화취집，위신경세포적축돌진일보생장제공물질지지。
Objective To observe the diffusion and aggregation of the microtubule associated protein tau(MAPT)modu?lated by phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten(PTEN)during the nerve cell differentiation by human bone marrow stem cells(BMSC)in vitro, and to analyse the signification. Methods Adult bone marrow stem cells were iso?lated and induced into nerve-like cells by some cytokines in vitro. The mRNA expression of MAPT was detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blot assay. The patterns of diffusion and aggregation of the MAPT association of the actin were indicated by Phalloidin-fluoresceineisothioeyanate (FITC) and immunofluorescence (IF) cyto-chemistry, and observed by the laser-confocal microscopy. Results The MAPT mRNA levels were 0.24 ± 0.04 and 0.52 ± 0.04 at 1 week and 2 weeks after the induction,which were significantly higher compared with those of BMSC (0.04 ± 0.02) after the induction (P<0.05). The MAPT protein levels were 0.18 ± 0.03 and 0.44 ± 0.05 at 1 week and 2 weeks after the induction, which were significantly higher compared those of BMSC (0.06 ± 0.04, P<0.05). The distribution patterns of MAPT were changed from the diffusion to the aggregation in cells after treatment by BPV. The nerve-like cells appeared the characteristic of po?larization. Conclusion When the nerve cells derived from bone marrow stem cells obtain the mature differentiation, PTEN may possess the ability of modulating the diffusion and aggregation of MAPT in vitro, also may provide a kind of material ba?sis for the growth of the nerve axon.
