中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2014年
6期
1711-1715
,共5页
殷杰%马珍妮%赵小娟%阮长耿
慇傑%馬珍妮%趙小娟%阮長耿
은걸%마진니%조소연%원장경
外周血%过度生长内皮细胞%细胞表型%血管性血友病因子
外週血%過度生長內皮細胞%細胞錶型%血管性血友病因子
외주혈%과도생장내피세포%세포표형%혈관성혈우병인자
peripheral blood%outgrowth endothelial cells%cell phenotype%von Willebrand factor
与内皮干细胞相比,外周血来源的过度生长内皮细胞(blood outgrowth endothelial cells,BOECs)富含血管新生和细胞黏附所需的蛋白,生物学特性更像内皮细胞;同时它克服了成熟的人脐血内皮细胞体外培养扩增量少和表型易发生改变的缺点,成为一种研究血管异常相关性疾病的新工具.本研究旨在建立从人外周血中体外培养、扩增BOECs,并进行鉴定的方法.采集外周血,梯度离心获得单个核细胞,接种于胶原铺板的细胞培养皿上,EGM-2培养4周.观察BOECs的形态学特征,流式细胞术分析细胞表面抗原表达.血管性血友病因子(yon Willebrand factor,vWF)多聚体分析BOECs上清vWF多聚体分布,荧光共聚焦显微镜鉴定细胞内vWF的贮存及vWF的刺激分泌.结果表明,体外诱导培养4周左右,出现克隆性生长的细胞集落,BOECs呈现“铺路石”样外观.经过3周左右的扩增后,过度生长的内皮细胞表达CD31、CD34、EPCR阳性,CD14、CD45、CD133阴性.收集BOECs上清,进行vWF多聚体分析,与正常血浆相比vWF多聚体分布无差异.在荧光共聚焦显微镜下观察,BOECs内贮存vWF,加入佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后,细胞内vWF增加,细胞表面可见vWF丝状结构.结论:本研究运用该实验方法在国内首次实现了人BOECs的体外培养、扩增及鉴定.该方法可以为血管性血友病病人发病机制的探讨提供天然的细胞模型,并可能为病人基因治疗提供新工具.
與內皮榦細胞相比,外週血來源的過度生長內皮細胞(blood outgrowth endothelial cells,BOECs)富含血管新生和細胞黏附所需的蛋白,生物學特性更像內皮細胞;同時它剋服瞭成熟的人臍血內皮細胞體外培養擴增量少和錶型易髮生改變的缺點,成為一種研究血管異常相關性疾病的新工具.本研究旨在建立從人外週血中體外培養、擴增BOECs,併進行鑒定的方法.採集外週血,梯度離心穫得單箇覈細胞,接種于膠原鋪闆的細胞培養皿上,EGM-2培養4週.觀察BOECs的形態學特徵,流式細胞術分析細胞錶麵抗原錶達.血管性血友病因子(yon Willebrand factor,vWF)多聚體分析BOECs上清vWF多聚體分佈,熒光共聚焦顯微鏡鑒定細胞內vWF的貯存及vWF的刺激分泌.結果錶明,體外誘導培養4週左右,齣現剋隆性生長的細胞集落,BOECs呈現“鋪路石”樣外觀.經過3週左右的擴增後,過度生長的內皮細胞錶達CD31、CD34、EPCR暘性,CD14、CD45、CD133陰性.收集BOECs上清,進行vWF多聚體分析,與正常血漿相比vWF多聚體分佈無差異.在熒光共聚焦顯微鏡下觀察,BOECs內貯存vWF,加入彿波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激後,細胞內vWF增加,細胞錶麵可見vWF絲狀結構.結論:本研究運用該實驗方法在國內首次實現瞭人BOECs的體外培養、擴增及鑒定.該方法可以為血管性血友病病人髮病機製的探討提供天然的細胞模型,併可能為病人基因治療提供新工具.
여내피간세포상비,외주혈래원적과도생장내피세포(blood outgrowth endothelial cells,BOECs)부함혈관신생화세포점부소수적단백,생물학특성경상내피세포;동시타극복료성숙적인제혈내피세포체외배양확증량소화표형역발생개변적결점,성위일충연구혈관이상상관성질병적신공구.본연구지재건립종인외주혈중체외배양、확증BOECs,병진행감정적방법.채집외주혈,제도리심획득단개핵세포,접충우효원포판적세포배양명상,EGM-2배양4주.관찰BOECs적형태학특정,류식세포술분석세포표면항원표체.혈관성혈우병인자(yon Willebrand factor,vWF)다취체분석BOECs상청vWF다취체분포,형광공취초현미경감정세포내vWF적저존급vWF적자격분비.결과표명,체외유도배양4주좌우,출현극륭성생장적세포집락,BOECs정현“포로석”양외관.경과3주좌우적확증후,과도생장적내피세포표체CD31、CD34、EPCR양성,CD14、CD45、CD133음성.수집BOECs상청,진행vWF다취체분석,여정상혈장상비vWF다취체분포무차이.재형광공취초현미경하관찰,BOECs내저존vWF,가입불파지(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)자격후,세포내vWF증가,세포표면가견vWF사상결구.결론:본연구운용해실험방법재국내수차실현료인BOECs적체외배양、확증급감정.해방법가이위혈관성혈우병병인발병궤제적탐토제공천연적세포모형,병가능위병인기인치료제공신공구.
