工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2015年
1期
50-55
,共6页
庆大霉素%基因敲除%genN%工程菌构建%生物信息学
慶大黴素%基因敲除%genN%工程菌構建%生物信息學
경대매소%기인고제%genN%공정균구건%생물신식학
gentamicin%gene knockout%genN%construction of mutant strain%bioinformatics
利用生物信息学方法分析庆大霉素生物合成特色基因genN的功能，构建genN缺失的基因工程菌。首先运用分子生物学技术构建同源重组质粒pFU604，其次重组质粒经接合转移导入绛红色小单孢菌M． purpurea GK1101。最后，基于同源重组机制，利用安普霉素抗性筛选及PCR鉴定，得到genN基因缺失的工程菌（M． purpurea GKN-27）。结果显示：较！发菌GK1101，基因工程菌GKN-27不再继续合成庆大霉素C1a和C2b，阻断庆大霉素生物合成代谢流，并积累分子量为497、524、523、503四种新的中间代谢物，新的中间代谢物将有望开发新型药物。同时，也表明genN不是C -6′N甲基化酶编码基因。
利用生物信息學方法分析慶大黴素生物閤成特色基因genN的功能，構建genN缺失的基因工程菌。首先運用分子生物學技術構建同源重組質粒pFU604，其次重組質粒經接閤轉移導入絳紅色小單孢菌M． purpurea GK1101。最後，基于同源重組機製，利用安普黴素抗性篩選及PCR鑒定，得到genN基因缺失的工程菌（M． purpurea GKN-27）。結果顯示：較！髮菌GK1101，基因工程菌GKN-27不再繼續閤成慶大黴素C1a和C2b，阻斷慶大黴素生物閤成代謝流，併積纍分子量為497、524、523、503四種新的中間代謝物，新的中間代謝物將有望開髮新型藥物。同時，也錶明genN不是C -6′N甲基化酶編碼基因。
이용생물신식학방법분석경대매소생물합성특색기인genN적공능，구건genN결실적기인공정균。수선운용분자생물학기술구건동원중조질립pFU604，기차중조질립경접합전이도입강홍색소단포균M． purpurea GK1101。최후，기우동원중조궤제，이용안보매소항성사선급PCR감정，득도genN기인결실적공정균（M． purpurea GKN-27）。결과현시：교！발균GK1101，기인공정균GKN-27불재계속합성경대매소C1a화C2b，조단경대매소생물합성대사류，병적루분자량위497、524、523、503사충신적중간대사물，신적중간대사물장유망개발신형약물。동시，야표명genN불시C -6′N갑기화매편마기인。
genN in gentamicin biosynthetic gene cluster can transfer the methylation of purpurosamine 6′C-N by bioinfor-matic analysis. The homologous recombination plasmid pFU604 was transformed into the M. purpurea GK1101 by using gene knockout principle and molecular biology technology. M. purpurea GKN-27 was successfully constructed on the basis of homologous recombination mechanism. The results showed M. purpurea GKN-27 accumulated four new intermediats (Mr:497,524,23,503). And M. purpurea GKN-27(Δ genN)blocked the biosynthesis of gentamicin compared with GK1101(Δ gntK). The four new components of GKN-27 remained to further study to develop new drugs. This study also indicated that genN was not associated with methyl transferase.
