中国实用眼科杂志
中國實用眼科雜誌
중국실용안과잡지
CHINESE JOURNAL OF PRACTICAL OPHTHALMOLOGY
2015年
3期
311-315
,共5页
刘洪安%曲景灏%张绍丹%李若溪
劉洪安%麯景灝%張紹丹%李若溪
류홍안%곡경호%장소단%리약계
小干扰RNA%人脐静脉内皮细胞%壳寡糖%脉络膜新生血管
小榦擾RNA%人臍靜脈內皮細胞%殼寡糖%脈絡膜新生血管
소간우RNA%인제정맥내피세포%각과당%맥락막신생혈관
siRNA%Human umbilical vein endothelial cell (HUVEC)%Chitooligosaccharides (COS)%CNV
目的 观察小于扰RNA与壳寡糖(siRNA与COS)纳米复合物体内外抗脉络膜新生血管的作用.方法 实验研究.对2011年9月至2012年6月以提取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养并传代.用激光粒度仪检测siRNA与COS纳米复合物的粒径与zeta电位.用琼脂糖凝胶电泳评价siRNA与COS质量比分别为1/1,1/5时所形成的siRNA复合物的情况.利用SRB方法评价COS分别为5μg/mL、25 μg/mL、50μg/mL时,对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制情况.以及50 nmol siRNA浓度条件下,siRNA/COS质量比为1/1、1/5时形成的复合物对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用.采用单因素方差分析方法进行组间比较.利用荧光素眼底血管造影方法观察不同质量比的siRNA与COS (1/1、1/5)减轻血管荧光素渗漏的情况.结果 激光粒度仪检测显示随着COS的量增加,siRNA与COS纳米复合物的粒径在93.9～459.8 nm范围内变化,zeta电位在-19.5～17.8 mV范围内变化.琼脂糖凝胶电泳显示当siRNA与COS质量比为1/5时,siRNA能够完全与壳寡糖结合.质量比为1/1时,只有部分siRNA与壳寡糖相结合.SRB结果显示,两种质量比所形成的复合物对HUVEC增殖的抑制作用均强于对照组,siRNA与COS质量比分别为1∶1,1∶5时,增殖率分别为(68.7±12.2)％,(58.8±10.1)％vs对照组100％,差异有统计学意义(F =12.321,P=0.008).COS 5μg/mL、25μ g/mL、50μg/mL三个剂量组均未显示出对HUVEC增殖的抑制作用(F =0.713,P=0.558).2周时,siRNA与COS组,激光斑处荧光渗漏较对照组明显减轻.结论 该研究表明siRNA与壳寡糖纳米复合物在抗脉络膜新生血管中可能起到积极的作用,且毒性较低.
目的 觀察小于擾RNA與殼寡糖(siRNA與COS)納米複閤物體內外抗脈絡膜新生血管的作用.方法 實驗研究.對2011年9月至2012年6月以提取人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養併傳代.用激光粒度儀檢測siRNA與COS納米複閤物的粒徑與zeta電位.用瓊脂糖凝膠電泳評價siRNA與COS質量比分彆為1/1,1/5時所形成的siRNA複閤物的情況.利用SRB方法評價COS分彆為5μg/mL、25 μg/mL、50μg/mL時,對人臍靜脈內皮細胞增殖的抑製情況.以及50 nmol siRNA濃度條件下,siRNA/COS質量比為1/1、1/5時形成的複閤物對人臍靜脈內皮細胞增殖的抑製作用.採用單因素方差分析方法進行組間比較.利用熒光素眼底血管造影方法觀察不同質量比的siRNA與COS (1/1、1/5)減輕血管熒光素滲漏的情況.結果 激光粒度儀檢測顯示隨著COS的量增加,siRNA與COS納米複閤物的粒徑在93.9～459.8 nm範圍內變化,zeta電位在-19.5～17.8 mV範圍內變化.瓊脂糖凝膠電泳顯示噹siRNA與COS質量比為1/5時,siRNA能夠完全與殼寡糖結閤.質量比為1/1時,隻有部分siRNA與殼寡糖相結閤.SRB結果顯示,兩種質量比所形成的複閤物對HUVEC增殖的抑製作用均彊于對照組,siRNA與COS質量比分彆為1∶1,1∶5時,增殖率分彆為(68.7±12.2)％,(58.8±10.1)％vs對照組100％,差異有統計學意義(F =12.321,P=0.008).COS 5μg/mL、25μ g/mL、50μg/mL三箇劑量組均未顯示齣對HUVEC增殖的抑製作用(F =0.713,P=0.558).2週時,siRNA與COS組,激光斑處熒光滲漏較對照組明顯減輕.結論 該研究錶明siRNA與殼寡糖納米複閤物在抗脈絡膜新生血管中可能起到積極的作用,且毒性較低.
목적 관찰소우우RNA여각과당(siRNA여COS)납미복합물체내외항맥락막신생혈관적작용.방법 실험연구.대2011년9월지2012년6월이제취인제정맥내피세포(HUVEC)배양병전대.용격광립도의검측siRNA여COS납미복합물적립경여zeta전위.용경지당응효전영평개siRNA여COS질량비분별위1/1,1/5시소형성적siRNA복합물적정황.이용SRB방법평개COS분별위5μg/mL、25 μg/mL、50μg/mL시,대인제정맥내피세포증식적억제정황.이급50 nmol siRNA농도조건하,siRNA/COS질량비위1/1、1/5시형성적복합물대인제정맥내피세포증식적억제작용.채용단인소방차분석방법진행조간비교.이용형광소안저혈관조영방법관찰불동질량비적siRNA여COS (1/1、1/5)감경혈관형광소삼루적정황.결과 격광립도의검측현시수착COS적량증가,siRNA여COS납미복합물적립경재93.9～459.8 nm범위내변화,zeta전위재-19.5～17.8 mV범위내변화.경지당응효전영현시당siRNA여COS질량비위1/5시,siRNA능구완전여각과당결합.질량비위1/1시,지유부분siRNA여각과당상결합.SRB결과현시,량충질량비소형성적복합물대HUVEC증식적억제작용균강우대조조,siRNA여COS질량비분별위1∶1,1∶5시,증식솔분별위(68.7±12.2)％,(58.8±10.1)％vs대조조100％,차이유통계학의의(F =12.321,P=0.008).COS 5μg/mL、25μ g/mL、50μg/mL삼개제량조균미현시출대HUVEC증식적억제작용(F =0.713,P=0.558).2주시,siRNA여COS조,격광반처형광삼루교대조조명현감경.결론 해연구표명siRNA여각과당납미복합물재항맥락막신생혈관중가능기도적겁적작용,차독성교저.
Objective To investigate the chitooligosaccharides (COS) as a transfection agent mediate the siRNA (target the VEGFR1) inhibit the proliferation of HUVEC.Methods HUVEC were extracted from neonatal umbilical cord.Size and zeta potential of siRNA/COS was measured by Malvern Zetasizer.Gel electrophoresis was used to evaluate the complex formation of siRNA/COS with different weight ratio (siRNA/COS=1/1 or 1/5).SRB test was used to estimate the inhibition proliferation rate of HUVEC.5μg/mL,25μg/mL,50μg/mL COS were added to HUVEC cells.And siRNA/COS (weight ratio 1/1 and 1/5) also were cultured with HUVEC.The concentration of siRNA was 50nmol.The blank medium was as control.The therapeutic efficacy was assessed by FFA.Results The size and zeta potential were from 93.9 nm to 459.8nm,-19.5mV to 17.8mV.The electrophoresis showed that siRNA/COS weight ratio=l/5 was no free siRNA in the complex nanoparticles.While there was still some free siRNA in siRNA/COS weight ratio=l/1.Both of the siRNA/COS weight ratio =1/1 (proliferation rate 68.7％±12.2％ vs control group 100％) and siRNA/COS weight ratio =1/5 (proliferation rate 58.8％±10.1％ vs control group 100％) showed inhibition significantly (F =12.321,P =0.008).COS showed no inhibition at 5μg/mL,25μg/mL,50μg/mL (F =0.713,P =0.558).One way ANOVA was used for the analysis.Two weeks later,the leakage of group siRNA/COS was less than control group.Conclusions The COS can mediate the siRNA inhibit the CNV with low toxicity.
