CAJ | 학술논문

目的:研究二甲苯诱导肾小管上皮细胞损伤的特点及表观遗传机制. 方法:不同浓度的二甲苯分别作用于体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),通过ELISA法检测肾小管上皮细胞培养上清中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)表达变化,流式技术检测肾小管上皮细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.采用人甲基化450K芯片和焦磷酸测序对二甲苯诱导损伤的肾小管上皮细胞DNA的CG位点进行甲基化筛选和验证. 结果:二甲苯诱导刺激后HK-2细胞NGAL表达增加,呈现剂量和时间依赖性;1.4mmol/L二甲苯作用48h后培养上清中NGAL的值较对照组显著增加[(4.52±0.49) pg/ml vs(2.30±0.11) pg/ml,P＜0.01].随加入二甲苯浓度的增加,HK-2细胞的凋亡比例和Caspase-3活性明显增加.甲基化芯片分析结果显示,二甲苯刺激后,HK-2细胞有243条探针甲基化出现显著差异,其中109条探针显示为甲基化水平增高,134条探针显示为甲基化水平降低,共涉及到138个基因.其中,细胞凋亡相关的基因(如Bax、FAF1等)出现了明显的甲基化改变,FAF1甲基化水平降低,Bax甲基化水平升高.焦磷酸测序的分析结果显示,二甲苯刺激后Bax基因(92％)的甲基化水平与对照组(85％)相比出现7％的甲基化改变;FAF1基因的甲基化水平比对照组降低6％,其甲基化改变的趋势与芯片结果相一致. 结论:二甲苯刺激可引起HK-2细胞的损伤和凋亡增加,Bax、FAF1等凋亡相关基因的甲基化水平改变可能参与二甲苯对肾小管上皮细胞损伤,其机制有待进一步研究.
목적:연구이갑분유도신소관상피세포손상적특점급표관유전궤제. 방법:불동농도적이갑분분별작용우체외배양적인신소관상피세포(HK-2),통과ELISA법검측신소관상피세포배양상청중중성립세포명효매상관지질운재단백(NGAL)표체변화,류식기술검측신소관상피세포조망,Caspase-3활성검측시제합검측Caspase-3활성.채용인갑기화450K심편화초린산측서대이갑분유도손상적신소관상피세포DNA적CG위점진행갑기화사선화험증. 결과:이갑분유도자격후HK-2세포NGAL표체증가,정현제량화시간의뢰성;1.4mmol/L이갑분작용48h후배양상청중NGAL적치교대조조현저증가[(4.52±0.49) pg/ml vs(2.30±0.11) pg/ml,P＜0.01].수가입이갑분농도적증가,HK-2세포적조망비례화Caspase-3활성명현증가.갑기화심편분석결과현시,이갑분자격후,HK-2세포유243조탐침갑기화출현현저차이,기중109조탐침현시위갑기화수평증고,134조탐침현시위갑기화수평강저,공섭급도138개기인.기중,세포조망상관적기인(여Bax、FAF1등)출현료명현적갑기화개변,FAF1갑기화수평강저,Bax갑기화수평승고.초린산측서적분석결과현시,이갑분자격후Bax기인(92％)적갑기화수평여대조조(85％)상비출현7％적갑기화개변;FAF1기인적갑기화수평비대조조강저6％,기갑기화개변적추세여심편결과상일치. 결론:이갑분자격가인기HK-2세포적손상화조망증가,Bax、FAF1등조망상관기인적갑기화수평개변가능삼여이갑분대신소관상피세포손상,기궤제유대진일보연구.