CAJ | 학술논문

为了筛选出适合褐飞虱Nilaparvata lugens类酵母共生菌蛋白质提取的细胞破碎方法,选择超声波破碎法、反复冻融法和液氮研磨法等3种细胞破碎方法提取共生菌吡虫啉敏感菌株和抗性菌株蛋白质.结果表明:菌体显微形态观察发现,使用超声波破碎法和液氮研磨法处理类酵母共生菌的细胞破碎效果均优于反复冻融法,处理后菌体分布均匀,破碎彻底;72 h是提取菌体蛋白质的最佳培养时间.定量分析表明:用超声波破碎法提取蛋白质质量浓度最高,液氮研磨法次之,反复冻融法提取蛋白质质量浓度的效果最差,各方法所提蛋白质质量浓度差异显著(P＜0.05).培养72 h后,超声波破碎法、液氮研磨法和反复冻融法提取的蛋白质质量浓度分别为2.82 g·L-1,2.62g·L-1和2.12 g·L-1(敏感菌株)及2.64 g·L-1,2.53 g·L-1和2.05 g·L-1(抗性菌株).十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析发现:超声波破碎法获得的蛋白质不仅得率高,且条带清晰,丰度好.液氮研磨法虽得率高,但蛋白质部分降解,条带不清晰;而反复冻融法获得的蛋白质得率最低.超声波破碎法更适合于褐飞虱类酵母共生菌的蛋白质提取,该研究为后续蛋白质的双向电泳实验和分离差异蛋白质提供技术支撑.
위료사선출괄합갈비슬Nilaparvata lugens류효모공생균단백질제취적세포파쇄방법,선택초성파파쇄법、반복동융법화액담연마법등3충세포파쇄방법제취공생균필충람민감균주화항성균주단백질.결과표명:균체현미형태관찰발현,사용초성파파쇄법화액담연마법처리류효모공생균적세포파쇄효과균우우반복동융법,처리후균체분포균균,파쇄철저;72 h시제취균체단백질적최가배양시간.정량분석표명:용초성파파쇄법제취단백질질량농도최고,액담연마법차지,반복동융법제취단백질질량농도적효과최차,각방법소제단백질질량농도차이현저(P＜0.05).배양72 h후,초성파파쇄법、액담연마법화반복동융법제취적단백질질량농도분별위2.82 g·L-1,2.62g·L-1화2.12 g·L-1(민감균주)급2.64 g·L-1,2.53 g·L-1화2.05 g·L-1(항성균주).십이완기광산납-취병희선알응효(SDS-PAGE)전영분석발현:초성파파쇄법획득적단백질불부득솔고,차조대청석,봉도호.액담연마법수득솔고,단단백질부분강해,조대불청석;이반복동융법획득적단백질득솔최저.초성파파쇄법경괄합우갈비슬류효모공생균적단백질제취,해연구위후속단백질적쌍향전영실험화분리차이단백질제공기술지탱.