食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2015年
5期
126-130
,共5页
张丽媛%马红丹%赵邯郸%徐丹丹%曲静%关淑艳%王丕武
張麗媛%馬紅丹%趙邯鄲%徐丹丹%麯靜%關淑豔%王丕武
장려원%마홍단%조함단%서단단%곡정%관숙염%왕비무
超氧化物歧化酶基因%低温聚合酶链式反应%酶活力
超氧化物歧化酶基因%低溫聚閤酶鏈式反應%酶活力
초양화물기화매기인%저온취합매련식반응%매활력
superoxide dismutase gene%low temperature polymerase chain reaction%enzyme activity
目的:利用低温聚合酶链式反应对大豆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性进行改良.方法:将6种在较低退火温度下扩增出的超氧化物歧化酶基因插入到表达载体pREP5N上,构建pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6表达载体,转入大肠杆菌后得到工程菌,诱导其在大肠杆菌中进行蛋白表达,并进行酶活力测定,筛选高酶活力菌株.结果:将已克隆的目的基因序列与已知的大豆MnSOD基因序列比对分析,一致性平均为86.57％,氨基酸序列同源性平均为82.58％.对已获得的6种工程菌进行蛋白质提取,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物的分子质量约为26 kD.经1％差异水平分析,改良后的SOD酶活力均有极显著提高,平均比对照菌株的酶活力提高1.95倍.结论:本实验证明低温聚合酶链式反应是改变酶活性的一种有效方法,为超氧化物歧化酶在生产中的应用提供了技术支持.
目的:利用低溫聚閤酶鏈式反應對大豆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性進行改良.方法:將6種在較低退火溫度下擴增齣的超氧化物歧化酶基因插入到錶達載體pREP5N上,構建pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6錶達載體,轉入大腸桿菌後得到工程菌,誘導其在大腸桿菌中進行蛋白錶達,併進行酶活力測定,篩選高酶活力菌株.結果:將已剋隆的目的基因序列與已知的大豆MnSOD基因序列比對分析,一緻性平均為86.57％,氨基痠序列同源性平均為82.58％.對已穫得的6種工程菌進行蛋白質提取,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳結果顯示錶達產物的分子質量約為26 kD.經1％差異水平分析,改良後的SOD酶活力均有極顯著提高,平均比對照菌株的酶活力提高1.95倍.結論:本實驗證明低溫聚閤酶鏈式反應是改變酶活性的一種有效方法,為超氧化物歧化酶在生產中的應用提供瞭技術支持.
목적:이용저온취합매련식반응대대두초양화물기화매(superoxide dismutase,SOD)적활성진행개량.방법:장6충재교저퇴화온도하확증출적초양화물기화매기인삽입도표체재체pREP5N상,구건pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6표체재체,전입대장간균후득도공정균,유도기재대장간균중진행단백표체,병진행매활력측정,사선고매활력균주.결과:장이극륭적목적기인서렬여이지적대두MnSOD기인서렬비대분석,일치성평균위86.57％,안기산서렬동원성평균위82.58％.대이획득적6충공정균진행단백질제취,십이완기류산납-취병희선알응효전영결과현시표체산물적분자질량약위26 kD.경1％차이수평분석,개량후적SOD매활력균유겁현저제고,평균비대조균주적매활력제고1.95배.결론:본실험증명저온취합매련식반응시개변매활성적일충유효방법,위초양화물기화매재생산중적응용제공료기술지지.
