畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2015年
4期
5-10
,共6页
隋煜霞%涂浩%张振超%王帅%宋小凯%徐立新%严若峰%李祥瑞
隋煜霞%塗浩%張振超%王帥%宋小凱%徐立新%嚴若峰%李祥瑞
수욱하%도호%장진초%왕수%송소개%서립신%엄약봉%리상서
巨型艾美耳球虫%Em8%外周血单核细胞%细胞因子%功能
巨型艾美耳毬蟲%Em8%外週血單覈細胞%細胞因子%功能
거형애미이구충%Em8%외주혈단핵세포%세포인자%공능
E.maxima%Em8%peripheral blood mononuclear cells%macrophages%cytokines%function
探讨了巨型艾美耳球虫抗原Em8体外对鸡外周血单核细胞(PBMCs)功能的影响.选取抗原基因EmTFP250中具有较好免疫保护性的Em8基因片段,并对其进行原核表达纯化出重组蛋白.无菌采集未被鸡球虫感染的鸡的外周血,分离出单核细胞,加入终浓度为5μg/mL的Em8重组蛋白进行体外培养,通过免疫荧光抗体技术观察重组蛋白与单核细胞的结合情况;Em8重组蛋白不同浓度体外刺激鸡外周血单核细胞,用qPCR技术测定各实验组单核细胞中IL-4、IL-17D、IFN-γ、TGF-β4的mRNA转录水平;采用CCK-8法测定细胞的增殖情况;Em8重组蛋白不同浓度(低、中、高浓度)体外与巨噬细胞共培养,测定巨噬细胞吞噬和NO分泌功能.结果表明:重组蛋白Em8是巨型艾美耳球虫的重要抗原,发挥广泛而重要的免疫作用.其中,重组蛋白Em8能够与外周血单核细胞结合并能刺激细胞因子IL-17D和IFN-γ的表达水平显著提高(P＜0.01),能够引起单核细胞增值(P＜0.01),巨噬细胞吞噬作用增强(P＜0.01)且NO分泌增加(P＜0.01).
探討瞭巨型艾美耳毬蟲抗原Em8體外對鷄外週血單覈細胞(PBMCs)功能的影響.選取抗原基因EmTFP250中具有較好免疫保護性的Em8基因片段,併對其進行原覈錶達純化齣重組蛋白.無菌採集未被鷄毬蟲感染的鷄的外週血,分離齣單覈細胞,加入終濃度為5μg/mL的Em8重組蛋白進行體外培養,通過免疫熒光抗體技術觀察重組蛋白與單覈細胞的結閤情況;Em8重組蛋白不同濃度體外刺激鷄外週血單覈細胞,用qPCR技術測定各實驗組單覈細胞中IL-4、IL-17D、IFN-γ、TGF-β4的mRNA轉錄水平;採用CCK-8法測定細胞的增殖情況;Em8重組蛋白不同濃度(低、中、高濃度)體外與巨噬細胞共培養,測定巨噬細胞吞噬和NO分泌功能.結果錶明:重組蛋白Em8是巨型艾美耳毬蟲的重要抗原,髮揮廣汎而重要的免疫作用.其中,重組蛋白Em8能夠與外週血單覈細胞結閤併能刺激細胞因子IL-17D和IFN-γ的錶達水平顯著提高(P＜0.01),能夠引起單覈細胞增值(P＜0.01),巨噬細胞吞噬作用增彊(P＜0.01)且NO分泌增加(P＜0.01).
탐토료거형애미이구충항원Em8체외대계외주혈단핵세포(PBMCs)공능적영향.선취항원기인EmTFP250중구유교호면역보호성적Em8기인편단,병대기진행원핵표체순화출중조단백.무균채집미피계구충감염적계적외주혈,분리출단핵세포,가입종농도위5μg/mL적Em8중조단백진행체외배양,통과면역형광항체기술관찰중조단백여단핵세포적결합정황;Em8중조단백불동농도체외자격계외주혈단핵세포,용qPCR기술측정각실험조단핵세포중IL-4、IL-17D、IFN-γ、TGF-β4적mRNA전록수평;채용CCK-8법측정세포적증식정황;Em8중조단백불동농도(저、중、고농도)체외여거서세포공배양,측정거서세포탄서화NO분비공능.결과표명:중조단백Em8시거형애미이구충적중요항원,발휘엄범이중요적면역작용.기중,중조단백Em8능구여외주혈단핵세포결합병능자격세포인자IL-17D화IFN-γ적표체수평현저제고(P＜0.01),능구인기단핵세포증치(P＜0.01),거서세포탄서작용증강(P＜0.01)차NO분비증가(P＜0.01).
