中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2015年
3期
17-19,23
,共4页
李达%万悦%马静%孔令杰%路佳琦%武文浩%路义鑫
李達%萬悅%馬靜%孔令傑%路佳琦%武文浩%路義鑫
리체%만열%마정%공령걸%로가기%무문호%로의흠
旋毛虫%TsAdSPI基因%原核表达%免疫原性
鏇毛蟲%TsAdSPI基因%原覈錶達%免疫原性
선모충%TsAdSPI기인%원핵표체%면역원성
以旋毛虫成虫的总RNA为模板,应用RT-PCR扩增获得旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI)基因.经克隆鉴定正确后,将TsAdSPI基因连接到pET-28a表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,并将纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.应用Western-blot及ELISA方法对重组蛋白的免疫原性和抗体效价进行分析.SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量为44 kDa,以包涵体形式表达.经Westem-blot和ELISA方法分析,制备的多克隆抗体效价可高达1:51200,表明该蛋白具有较好免疫原性.表明TsAdSPI蛋白可作为旋毛虫感染早期血清学诊断方法的候选抗原,为新型的抗旋毛虫及相关寄生虫药物研发打下结实基础.
以鏇毛蟲成蟲的總RNA為模闆,應用RT-PCR擴增穫得鏇毛蟲成蟲絲氨痠蛋白酶抑製劑(TsAdSPI)基因.經剋隆鑒定正確後,將TsAdSPI基因連接到pET-28a錶達載體,轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中進行IPTG誘導錶達,併將純化後的目的蛋白免疫新西蘭大白兔,製備多剋隆抗體.應用Western-blot及ELISA方法對重組蛋白的免疫原性和抗體效價進行分析.SDS-PAGE結果顯示,目的蛋白分子質量為44 kDa,以包涵體形式錶達.經Westem-blot和ELISA方法分析,製備的多剋隆抗體效價可高達1:51200,錶明該蛋白具有較好免疫原性.錶明TsAdSPI蛋白可作為鏇毛蟲感染早期血清學診斷方法的候選抗原,為新型的抗鏇毛蟲及相關寄生蟲藥物研髮打下結實基礎.
이선모충성충적총RNA위모판,응용RT-PCR확증획득선모충성충사안산단백매억제제(TsAdSPI)기인.경극륭감정정학후,장TsAdSPI기인련접도pET-28a표체재체,전화지대장간균BL21(DE3)중진행IPTG유도표체,병장순화후적목적단백면역신서란대백토,제비다극륭항체.응용Western-blot급ELISA방법대중조단백적면역원성화항체효개진행분석.SDS-PAGE결과현시,목적단백분자질량위44 kDa,이포함체형식표체.경Westem-blot화ELISA방법분석,제비적다극륭항체효개가고체1:51200,표명해단백구유교호면역원성.표명TsAdSPI단백가작위선모충감염조기혈청학진단방법적후선항원,위신형적항선모충급상관기생충약물연발타하결실기출.
