CAJ | 학술논문

目的：在大肠杆菌中克隆、表达金黄色葡萄球菌氨基糖苷类耐药基因：腺苷酰转移酶基因,为其功能研究奠定基础。方法按金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶蛋白编码序列设计引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增腺苷酰转移酶基因。将所得片段与pGEX-4t-1(+)载体连接,转化到感受态大肠杆菌BL21(DE3),提取质粒进行双酶切及测序鉴定, IPTG诱导重组蛋白表达, SDS-PAGE及Western-blot对重组蛋白进行鉴定。结果使用金黄色葡萄球菌基因组为模板,成功扩增约800 bp目的片段,重组质粒双酶切见目的片段,测序显示腺苷酰转移酶基因长783 bp,启始于ATG,终止于TAG,预测的等电点及分子量分别为7.75、28975.44,目的基因与Genbank金葡腺苷酰转移酶同源性为99%, SDS-PAGE及Western-blot显示在55 kD左右见重组蛋白表达。结论在大肠杆菌中成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶基因,为其功能研究提供了物质基础。
목적：재대장간균중극륭、표체금황색포도구균안기당감류내약기인：선감선전이매기인,위기공능연구전정기출。방법안금황색포도구균선감선전이매단백편마서렬설계인물,이금황색포도구균기인조DNA위모판,확증선감선전이매기인。장소득편단여pGEX-4t-1(+)재체련접,전화도감수태대장간균BL21(DE3),제취질립진행쌍매절급측서감정, IPTG유도중조단백표체, SDS-PAGE급Western-blot대중조단백진행감정。결과사용금황색포도구균기인조위모판,성공확증약800 bp목적편단,중조질립쌍매절견목적편단,측서현시선감선전이매기인장783 bp,계시우ATG,종지우TAG,예측적등전점급분자량분별위7.75、28975.44,목적기인여Genbank금포선감선전이매동원성위99%, SDS-PAGE급Western-blot현시재55 kD좌우견중조단백표체。결론재대장간균중성공극륭、표체료금황색포도구균선감선전이매기인,위기공능연구제공료물질기출。