西南民族大学学报（自然科学版）
西南民族大學學報（自然科學版）
서남민족대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SOUTHWEST NATIONALITIES COLLEGE·NATURAL SCIENCE EDITION
2015年
2期
150-155
,共6页
王琼%唐俊妮%汤承%陈娟%刘骥%陈炼红
王瓊%唐俊妮%湯承%陳娟%劉驥%陳煉紅
왕경%당준니%탕승%진연%류기%진련홍
微波炉加热%DNA提取%PCR扩增%食源性病原细菌
微波爐加熱%DNA提取%PCR擴增%食源性病原細菌
미파로가열%DNA제취%PCR확증%식원성병원세균
利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法.在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证.并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析.6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增.针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103 cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104 cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105 cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106 cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107 cfu/ml.进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮.该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段.
利用微波加熱原理,探索一種快速、簡單、高效提取細菌DNA用于常規PCR快速檢測的方法.在微波爐額定功率800 W條件下分彆對大腸桿菌、金黃色葡萄毬菌、單增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙門氏菌以及誌賀氏菌6種常見食源性病原菌進行微波處理,離心取上清,穫取細菌DNA,將樣本DNA進行PCR擴增及瓊脂糖凝膠電泳進行驗證.併進一步採用微波加熱方法針對6種病原菌最低檢齣濃度和混閤提取6種病原菌DNA的PCR檢測進行分析.6種病原菌在微波爐中加熱40-130 s的上清DNA樣本均能用于常規PCR擴增.針對檢齣濃度的分析錶明,副溶血弧菌的最低檢齣濃度為103 cfu/ml,金黃色葡萄毬菌為104 cfu/ml,腸齣血性大腸桿菌為105 cfu/ml,腸炎沙門氏菌和福氏誌賀氏菌的最低檢齣濃度為106 cfu/ml,針對單覈細胞增生李斯特氏桿菌的的最低檢齣濃度為107 cfu/ml.進行6種混閤菌微波共提取時,其中5種病原菌的特異性基因都能擴齣,併且條帶很亮.該微波提取方法具有快速,簡單,高效的特點,能滿足大部分食源性病原菌的常規PCR檢測需求,大大節約瞭時間和成本,具有廣汎的適用性,為細菌快速分子檢測提供瞭簡便手段.
이용미파가열원리,탐색일충쾌속、간단、고효제취세균DNA용우상규PCR쾌속검측적방법.재미파로액정공솔800 W조건하분별대대장간균、금황색포도구균、단증리사특씨균、부용혈호균、사문씨균이급지하씨균6충상견식원성병원균진행미파처리,리심취상청,획취세균DNA,장양본DNA진행PCR확증급경지당응효전영진행험증.병진일보채용미파가열방법침대6충병원균최저검출농도화혼합제취6충병원균DNA적PCR검측진행분석.6충병원균재미파로중가열40-130 s적상청DNA양본균능용우상규PCR확증.침대검출농도적분석표명,부용혈호균적최저검출농도위103 cfu/ml,금황색포도구균위104 cfu/ml,장출혈성대장간균위105 cfu/ml,장염사문씨균화복씨지하씨균적최저검출농도위106 cfu/ml,침대단핵세포증생리사특씨간균적적최저검출농도위107 cfu/ml.진행6충혼합균미파공제취시,기중5충병원균적특이성기인도능확출,병차조대흔량.해미파제취방법구유쾌속,간단,고효적특점,능만족대부분식원성병원균적상규PCR검측수구,대대절약료시간화성본,구유엄범적괄용성,위세균쾌속분자검측제공료간편수단.
