徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2015年
1期
6-11
,共6页
万一元%万莉%惠红霞%王晓炜%程劲松
萬一元%萬莉%惠紅霞%王曉煒%程勁鬆
만일원%만리%혜홍하%왕효위%정경송
食管癌%CXCR4基因%RNA干扰%壳聚糖
食管癌%CXCR4基因%RNA榦擾%殼聚糖
식관암%CXCR4기인%RNA간우%각취당
esophageal carcinoma%CXCR4 gene%RNA interference%chitosan
目的 探讨沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC109细胞体外增殖、侵袭能力的影响.方法 化学合成两对针对CXCR4基因的干扰序列(实验序列、对照序列),构建表达小发夹RNA(shRNA)的质粒,以壳聚糖为基因载体转染人食管癌EC109细胞.荧光显微镜观测转染效率,Western blot法分析转染前后CXCR4蛋白的变化,集落形成实验检测细胞增殖能力,transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力,ELISA法检测转染前后EC109细胞上清液血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平的变化.结果 酶切电泳、测序证实成功构建靶向CXCR4基因的shRNA表达质粒.以壳聚糖为载体转染HEK293A,转染效率达80％以上.与空白对照组、实验对照组比较:转染实验组质粒能明显下调CXCR4蛋白表达;抑制EC109细胞增殖,影响其集落形成能力;降低EC109细胞穿膜数目,影响其侵袭能力;时间依赖性降低EC109细胞上清液中VEGF水平,转染48 h及72 h后与空白对照组、实验对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CXCR4基因在食管癌细胞生长、侵袭方面发挥重要作用,沉默其表达可降低食管癌细胞增殖,抑制肿瘤细胞集落形成和侵袭能力,抑制细胞分泌VEGF能力.CXCR4基因有可能成为食管癌治疗新的、有效靶点.
目的 探討沉默CXCR4基因對食管鱗癌EC109細胞體外增殖、侵襲能力的影響.方法 化學閤成兩對針對CXCR4基因的榦擾序列(實驗序列、對照序列),構建錶達小髮夾RNA(shRNA)的質粒,以殼聚糖為基因載體轉染人食管癌EC109細胞.熒光顯微鏡觀測轉染效率,Western blot法分析轉染前後CXCR4蛋白的變化,集落形成實驗檢測細胞增殖能力,transwell侵襲小室檢測細胞侵襲能力,ELISA法檢測轉染前後EC109細胞上清液血管內皮細胞生長因子(VEGF)水平的變化.結果 酶切電泳、測序證實成功構建靶嚮CXCR4基因的shRNA錶達質粒.以殼聚糖為載體轉染HEK293A,轉染效率達80％以上.與空白對照組、實驗對照組比較:轉染實驗組質粒能明顯下調CXCR4蛋白錶達;抑製EC109細胞增殖,影響其集落形成能力;降低EC109細胞穿膜數目,影響其侵襲能力;時間依賴性降低EC109細胞上清液中VEGF水平,轉染48 h及72 h後與空白對照組、實驗對照組比較,差異有統計學意義(P＜0.05).結論 CXCR4基因在食管癌細胞生長、侵襲方麵髮揮重要作用,沉默其錶達可降低食管癌細胞增殖,抑製腫瘤細胞集落形成和侵襲能力,抑製細胞分泌VEGF能力.CXCR4基因有可能成為食管癌治療新的、有效靶點.
목적 탐토침묵CXCR4기인대식관린암EC109세포체외증식、침습능력적영향.방법 화학합성량대침대CXCR4기인적간우서렬(실험서렬、대조서렬),구건표체소발협RNA(shRNA)적질립,이각취당위기인재체전염인식관암EC109세포.형광현미경관측전염효솔,Western blot법분석전염전후CXCR4단백적변화,집락형성실험검측세포증식능력,transwell침습소실검측세포침습능력,ELISA법검측전염전후EC109세포상청액혈관내피세포생장인자(VEGF)수평적변화.결과 매절전영、측서증실성공구건파향CXCR4기인적shRNA표체질립.이각취당위재체전염HEK293A,전염효솔체80％이상.여공백대조조、실험대조조비교:전염실험조질립능명현하조CXCR4단백표체;억제EC109세포증식,영향기집락형성능력;강저EC109세포천막수목,영향기침습능력;시간의뢰성강저EC109세포상청액중VEGF수평,전염48 h급72 h후여공백대조조、실험대조조비교,차이유통계학의의(P＜0.05).결론 CXCR4기인재식관암세포생장、침습방면발휘중요작용,침묵기표체가강저식관암세포증식,억제종류세포집락형성화침습능력,억제세포분비VEGF능력.CXCR4기인유가능성위식관암치료신적、유효파점.
