CAJ | 학술논문

人类NKX2.5基因(NK2 homeobox 5，NKX2.5)提前终止密码子(Premature termination codon，PTC)突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前，已报道的NKX2.5 PTC突变有8个(E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、Y259X和C264X)。为了检测tRNA抑制子是否对PTC突变诱导通读产生有功能的全长蛋白，文章将8个NKX2.5 PTC突变克隆到pcDNA3.1(-)载体，将NKX2.5全长和E109X、Q149X及C264X克隆到pEGFP-N1载体，形成NKX2.5-EGFP融合质粒。将NKX2.5-EGFP与对应的tRNA抑制子质粒分别或共转染后观察绿色荧光数量定性判断tRNA抑制子是否诱导通读。Western blotting检测通读后全长蛋白和截短蛋白表达并计算通读效率。Real-time PCR检测NKX2.5下游重要调控基因Cx43 mRNA的表达判断通读后蛋白功能。结果表明，文章成功构建了8个基于pcDNA3.1(-)的NKX2.5表达质粒、4个基于pEGFP-N1的质粒；tRNA抑制子tRNA am能有效通读Q149X、Q170X、Q187X和Q198X，且对后三者的通读效率均在50%以上；tRNA op能有效通读C264X，通读效率约50%左右；tRNA oc不能通读NKX2.5 PTC突变；各通读后样本Cx43 mRNA相对表达量增加7%~41.7%；tRNA am和tRNA op能有效通读NKX2.5 PTC突变，产生具有功能的全长蛋白，但tRNA抑制子对细胞的其他影响还不明确，有待于进一步观察。
인류NKX2.5기인(NK2 homeobox 5，NKX2.5)제전종지밀마자(Premature termination codon，PTC)돌변회인기방간격결손、방실전도조체등선천성심장병。목전，이보도적NKX2.5 PTC돌변유8개(E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、Y259X화C264X)。위료검측tRNA억제자시부대PTC돌변유도통독산생유공능적전장단백，문장장8개NKX2.5 PTC돌변극륭도pcDNA3.1(-)재체，장NKX2.5전장화E109X、Q149X급C264X극륭도pEGFP-N1재체，형성NKX2.5-EGFP융합질립。장NKX2.5-EGFP여대응적tRNA억제자질립분별혹공전염후관찰록색형광수량정성판단tRNA억제자시부유도통독。Western blotting검측통독후전장단백화절단단백표체병계산통독효솔。Real-time PCR검측NKX2.5하유중요조공기인Cx43 mRNA적표체판단통독후단백공능。결과표명，문장성공구건료8개기우pcDNA3.1(-)적NKX2.5표체질립、4개기우pEGFP-N1적질립；tRNA억제자tRNA am능유효통독Q149X、Q170X、Q187X화Q198X，차대후삼자적통독효솔균재50%이상；tRNA op능유효통독C264X，통독효솔약50%좌우；tRNA oc불능통독NKX2.5 PTC돌변；각통독후양본Cx43 mRNA상대표체량증가7%~41.7%；tRNA am화tRNA op능유효통독NKX2.5 PTC돌변，산생구유공능적전장단백，단tRNA억제자대세포적기타영향환불명학，유대우진일보관찰。